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多药耐药基因－腺病毒重组表达载体的构建及鉴定

【摘要】目的构建多药耐药（multidrugresistance，MDR）基因-腺病毒重

组表达载体。方法将MDR1基因插入到腺病毒载体，用磷酸钙沉淀法将此重组

载体转染到293细胞，制备重组病毒悬液并感染靶细胞进行鉴定。结果构建的

MDR1-腺病毒载体在293细胞中大量产生，病毒滴度达109PFU/ml，此病毒感

染靶细胞后，在靶细胞中有MDR1基因的表达。结论成功构建了MDR1-腺病

毒重组表达载体。

【Abstract】ObjectiveConstructionofmulti-drugresistancegene(MDR)-

adenoviralrecombinantexpressionvector．MethodsMDR1genewillbeinsertedinto

theadenovirusvector，bycalciumphosphateprecipitationmethodtherecombinant

plasmidtransfectinto293cells．Recombinantvirussuspensionismadeandinfeced

targetcellsandtoindentify．ResultsConstructedMDR1-adenovirusvectorproduces

alargenumberin293cells，thevirustiterisupto109PFU/ml．Aftertherecombinant

virusinfectedtargetcellsinthetargetcellshavetheexpressionofMDR1

gene．ConclusionMDR1-recombinantadenorirusvectorhasbeensuccessfully

constructcd．

【Keywords】Multi-drugresistancegene(MDR1)；Adenovirusvector；

Transfection

多药耐药性（multidrugresistance，MDR）是指肿瘤细胞能对多种结构、

功能及杀伤机制均不同的化疗药物产生耐受。肿瘤组织多药耐药性的产生主要是

由于肿瘤细胞内多药耐药基因（MDR1）异常扩增和过渡表达所致，表达产物

为分子量170kd的糖蛋白（P-glycoprotein，P-GP）。该蛋白作为一种依赖

ATP能量的大分子药物或毒物的溢出泵，可把进入细胞内的药物或异物排出细

胞外，使肿瘤细胞产生耐药。利用MDR1的这一特性，本研究使用腺病毒作为

载体，构建MDR1基因-腺病毒重组表达载体，并转导入脐血有核细胞，对此

重组载体转染靶细胞的有效性进行鉴定。

1材料与方法

1．1材料PHAMDR质粒,美国国立健康研究院GreegarD．Odegaarden博

士惠赠；腺病毒载体试剂盒,DNA修平试剂盒，粘粒载体，TaKaRa公司；

RPMI1640,GIBCO公司；FCS，TBD公司；DNA纯化/回收试剂盒，北京鼎国；

MDR1包装试剂盒，Novagen公司。HEK293细胞，感受态大肠杆菌DH5α，由

吉林省肿瘤防治研究所保存。

1．2MDR1的体外扩增将PHAMDR质粒转化到感受态大肠杆菌DH5α[1]，

并将此感受态细菌接种到含氨苄(50μg/ml)的LB培养基中筛选阳性克隆进行扩

增，用碱裂解法提取PHAMDR质粒DNA[2]。

1．3扩增的PHAMDR质粒的鉴定及回收

1．3．1PHAMDR质粒的鉴定将提取的质粒DNA沉淀溶解后用XholI和

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