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细胞病变抑制法测定干扰素生物学活性

IFN-α2b经PEG修饰后其活性位点仍然保留，因而我们沿用经典的细胞病

变抑制法作为PEG-IFN-α2b的生物学活性检测方法，以《中华人民共和国药典》

（2010年版）三部附录XC为检测依据。细胞病变抑制法作为一项成熟的生物

学活性检测技术，已经广泛用于多类IFN亚型的生物学活性检测，并被收录入国

家药典，目前国内上市IFN相关产品的活性检测多采用的该方法，多年的实践证

明该方法检测结果稳定，可靠，重现性好。在此基础上，我们将该方法运用于

PEG-IFN-α2b的生物学活性检测，并完成了专属性、线性、准确性、精密度和

耐用性的方法学验证。具体操作如下：

WISH细胞传代培养2～3天后经EDTA消化，用含10%新生牛血清的MEM培养

5

液，配成3.0×10个细胞/ml，接种于96孔细胞培养板中，每孔100μl，于37℃，

5%CO条件下培养4～6小时；将4倍系列稀释的标准品溶液和供试品溶液移入接

2

种WISH细胞的培养板中，每孔加入100μl，于37℃，5%CO条件下培养18～24

2

小时；弃去细胞培养板中的上清液，加入VSV继续培养，待达到病变要求染色，

脱色，于570nm处测定吸光度，根据标准品和待测品稀释度的差异，计算出待测

样品的生物活性。

1.专属性

干扰素生物学活性测定法，依据干扰素可以保护人羊膜细胞（WISH）免受水

泡性口炎病毒（VSV）破坏的作用，用结晶紫对存活的WISH细胞染色，在波长

570nm处测定其吸光度，得到干扰素对WISH细胞的保护效应曲线，以此测定干

扰素生物学活性。满足专属性要求。

2.线性

干扰素对WISH细胞的保护效应与剂量相关，在干扰素活性为0.01IU/ml～

250IU/ml范围内呈现典型的S型曲线，其相关系数（R）大于0.95以上，相关

系数的平方（R2）大于0.90以上，满足线性要求。

sda）

3.准确性

以小试制备IFNα2b为样品1，以小试制备PEG-IFNα2b为样品2（生物学

活性标示量为1000IU/ml）进行准确性验证。

结果如下：sda）

样品1样品2

效价（IU/ml）10751185

偏差（IU/ml）75185

准确度7.5%18.5%

生物制品的生物学活性为相对活性，与同时测定的标准品比较而得。由同时

测定的IFNα2b及PEG-IFNα2b与标准品的剂量反应曲线可以看出，三条曲线具

有平行性，即IFNα2b及PEG-IFNα2b与标准品的活性成分仅是量的不同而没有

质的区别，可由此计算出相对活性结果。

4.精密度

由于生物活性（或效价）测定是生物制品质控中的重要指标，该方法的可

靠性会直接影响产品的可控性，所以我们对生物活性测定方法的精密度验证非常

重视。分别对IFN和PEG-IFN进行了精密度研究，检测结果下表，相对标准偏差

分别为7.0%和14.7%，符合细胞实验精密度要求小于30%要求。

表IFN效价指标的精密度验证

IFN第一次第二次第三次

8

效价（×10IU）1.121.211.29

8

平均值（×10IU）1.21