生物合成和加工.ppt

乙肝病毒(haptitisBvirus,HBV)是一条链带缺口的环状双连DNA病毒，病毒粒子携带DNA聚合酶（逆转录酶）和蛋白质引物。当细胞感染HBV后，缺口即由DNA聚合酶填补，并转录+RNA，并装配到核衣壳内，进行逆转录，并组装成病毒粒子。但与逆转录病毒的区别：复制过程：DNA→RNA→DNAvsRNA→DNA→RNA引物：蛋白质vstRNA末端重复序列：无vs有整合：低频vs高效第85页,共89页，星期六，2024年，5月3.逆转录的生物学意义扩充了中心法则有助于对病毒致癌机制的了解与真核细胞分裂和胚胎发育有关逆转录酶是分子生物学重要工具酶第86页,共89页，星期六，2024年，5月三.逆转座子的种类及作用概念:是一类在转座过程中需要以RNA为中间体，经过逆转录再分散到基因组中的可移动因子称为逆转座子（retroposon)或逆转录转座子（retrotransposon)。逆转座子结构特点：自身编码逆转录酶和/或整合酶分两类I:具有与逆转录病毒类似的长末端重复序列（LTR）,含gag和pol基因，无env基因，如酵母Ty因子、果蝇copia.II:不具有LTR，但有3’polyA,中心编码区含有含gag和pol类似的序列，如果蝇I因子，哺乳动物长分散因子。第87页,共89页，星期六，2024年，5月逆转座子的转座作用插入位点随机，但有一定的选择性，如果蝇gypsy靶序列5’TAYATA3’（Y嘧啶），并造成4bp的重复TAYA,它们倾向于整合到富含AT的区域。逆转座子自身编码整合酶，整合部位的两侧有固定长度的正向重复，整合酶能交错切开靶序列。第88页,共89页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第89页,共89页，星期六，2024年，5月Ⅱ类内含子的剪接机制Mg2+p-Ap3’OH套环的形成pP-AHO3’外显子连接p2‘HO-Ap5’3‘第53页,共89页，星期六，2024年，5月hnRNA剪接反应是在剪接体（splicesome)上进行的剪接体由5种U系列snRNA和50多蛋白质组成（U1、U2、U4、U5、U6）与II型内含子剪接相似，只是由剪接体完成真核生物所有编码蛋白质的核结构基因，其内含子的左端均为GT，右端均为AG。此规律称GT-AG规律，对于mRNA就是GU-AG此规律不适合于线粒体、叶绿体的内含子，也不适合于tRNA和某些rRNA的核结构基因hnRNA的拼接第54页,共89页，星期六，2024年，5月真核细胞内存在许多种类的小分子RNA，大小在100-300nt，有些由聚合酶III转录，有些由聚合酶II转录。核内小RNA（snRNA）主要存在于核内，细胞质小RNA（scRNA）主要存在于细胞质。重要的snRNA有U系列snRNA，因其尿嘧啶含量高而得名。U系列snRNA通常都与多肽或蛋白质结合形成核糖核蛋白颗粒（RNP）。U-snRNA参与hnRNA的拼接过程。U3-snRNA与rRNA前体的加工有关，U1、U2、U4、U5、U6都与hnRNA的加工有关。第55页,共89页，星期六，2024年，5月第56页,共89页，星期六，2024年，5月tRNA前体的拼接酵母tRNA前体的拼接研究的最清楚。酵母tRNA约有400个基因，有内含子的基因约占1/10，长度14-46bp，没有保守性。切除内含子的酶识别的是tRNA的二级结构，而不是保守序列。拼接过程：第一步切除内含子第二步RNA连接酶将两个tRNA半分子连接第57页,共89页，星期六，2024年，5月酵母tRNAPhe及其前体的结构第58页,共89页，星期六，2024年，5月酵母和植物tRNA前体的拼接过程第59页,共89页，星期六，2024年，5月反式拼接内含子的拼接一般都是发生在同一个基因内，切除内含子，相邻的外显子彼此连接，称为顺式拼接（cis-splicing），但也有另一种情况，即不同基因的外显子剪接后相互连接，此称为反式拼接（trans-splicing）。反式拼接的情况较为稀少，较典型的例子是锥虫表面糖蛋白基因VSG(variablesurfaceglycoprotein)，线虫的肌动蛋白基因（actingenes），和衣藻（Chlamydomonas）叶绿体DNA中含有的psa基因。第60页,共89页，星期六，2024年，5月第61页,共89页，星期六，2024年，5月选择