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大肠杆菌感受态细胞的制备与转化实验目的通过本实验，学习大肠杆菌感受态细胞制备和转化的原理与技术方法。感受态细胞(Competentcells):受体细胞经过一些特殊方法处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能使许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(petentcell)。二.实验原理转化（transformation）：是将异源DNA分子引入受体细胞，使其获得新的遗传性状的一种技术方法。进入细胞的DNA分子通过复制表达，才能实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。化学法：使用化学试剂（如CaCl2）制备的感受态细胞，通过热击处理将载体DNA分子导入受体细胞；01电转化法：通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。02大肠杆菌转化的方法：03营养筛选标记02选择性标记主要有两类：01利用导入的DNA上的选择性标记，区分转化子与非转化子。04抗性筛选标记转化子的筛选：实验方法挑取大肠杆菌DH5α单菌落，接于5mLLB液体培养基中37℃振荡培养过夜以1:50比例将1ml菌液转移到新鲜LB液体培养基中，37℃振荡培养1.5－2hr左右，使A600在0.4－0.5左右将培养液4ml转移到5ml离心管中，4℃，2000g离心3min弃上清，加0.5mL用冰预冷的0.1MCaCl2溶液，轻轻吹打或摇动混匀细胞注意：加入CaCl2动作需轻柔，勿剧烈震荡，并且尽量使细胞处于低温中12冰上放置20min，2000g离心2min弃上清，加0.1ml预冷的0.1MCaCl2溶液，轻轻吹打或摇动混匀细胞，即得感受态细胞注意：离心后观察沉淀，如果出现中间空心的沉淀说明操作正常12
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