临床输血检验技术 课件 项目三 输血相关传染病病原学标志物检测.pptx

项目三输血相关传染病病原学标志物检测

1、掌握检测标本的采集、运输、交接与处理的基本原则；2、掌握输血相关传染病病原学标志物的检测策略；3、掌握输血相关传染病病原学标志物酶联免疫吸附试验的原理、方法、结果判断、待查标本的处理原则。4、掌握HIV、HBV、HCV核酸检测的原理、实验有效性的判定、结论的判断。5、知道反应性和非反应性标本保存的方法，熟悉检测结果的复核、报告发布、报告复核、报告审核签发的流程学习目标

任务一检测标本的采集、运输、交接和处理

酶免检测血液样本1EDTA-K2真空抗凝管留取5ml血液样本核酸检测血液样本2必须采用无菌、无DNA酶、无RNA酶、带分离胶的一次性真空EDTA-K2抗凝试管采集后4小时内进行离心，离心力要求为1200～1600g，时间不少于15分钟；标本离心后上下层界面清楚明显，上清液应透明清亮，呈淡黄色，无严重溶血，中层分离胶紧实均匀；离心后的标本上下分层界线清楚明显，标本量不得少于5ml。采集的血液标本应尽快放入现场2～8℃冰箱内标本采集

标本运输采用试管架等固定装置固定标本防止标本散落；标本应隔离密封包装，包装材料应满足防水、防破损、防外泄、易于消毒处理，装箱时应保持标本管口向上，具有一定保温效果。应避免运输途中发生剧烈震荡而导致样本破损、渗漏或溶血。有温控措施，保证整个冷链系统能有效控制温度在2～10℃范围。标本运输

检查核查无误后签字确认标本交接核酸标本的预离心情况标本与送检单信息对应性和完整性运输过程温度是否在2～10℃范围标本来源、数量；核查标本管是否选用错误、有无破损，、渗漏、管内有无异物；标本是否满足既定的质量要求，有无严重溶血、抗凝不充分、标本量不足或被稀释

标本离心核酸管应使用低温离心机酶免管低温、常温离心均可离心后应检查标本有无溶血、样本管是否破损、血浆层有无异物。异常标本应交相关部门处理。标本处理

编号拔塞摆架标本处理

将未检标本直接放入2～8℃待检标本冰箱保存A当日检测结果为阳性的标本挑出，在每个试管条码上注明日期和阳性项目，放在试管架上（HIV初筛阳性的标本放在专用试管架上），保存于2～8℃已检不合格标本专用冰箱中，填写血液检测阳性样本登记表B将当日已检测合格的标本放入空试剂盒中，标注日期和架次，保存于2～8℃已检合格样本冰箱。C将待检标本标识后（放入试管架上，直接保存于2～8℃待检样本冰箱中。D检测后标本的保存标本处理

任务二病原学标志物检测

检测项目检测方法（1）核酸扩增检测技术（2）血清学检测技术（3）速率法（湿化学法）人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒(HCV)、梅毒螺旋体感染标志物等检测项目

实施核酸检测试剂批签发之前2遍血清学检测和1遍核酸检测，应采用2个不同生产厂家的试剂HIV、HBV、HCV感染标志物检测实施核酸检测试剂批签发之后核酸和血清学检测2种方法各进行1次检测检测策略

梅毒螺旋体感染标志物采用2个不同生产厂家的血清学检测试剂进行检测检测策略

检测流程

检测流程

原理采用双抗原夹心法和双抗体夹心法酶联免疫吸附试验原理，在微孔条上预包被重组HIV抗原和抗P24单抗，配以生物素抗体、酶标记抗原、酶标记亲和素及TMB显色剂等其它试剂，检测人血清或血浆中的HIV-1型和（或）HIV-2型抗体和HIVP24抗原。人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测

样本EDTA-K2真空采血管留取血液样本器材与试剂手工加样仪、全自动加样及酶免处理系统、人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）等人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测

操作试剂的平衡检查试剂盒配制洗液检查微孔反应板加样检查加样效果检测人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测

结果判断一种或两种可疑或反应性单试剂待查单试剂双孔复试双试剂待查双试剂单孔复试一孔或两孔为可疑或反应性两孔均为无反应性任一种试剂为可疑或反应性两种试剂均为无反应性HIV阳性HIV阳性HIV阴性HIV阴性人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测两种试剂结果无反应性阴性

HIV初筛阳性样本的送检疫情上报人员填写HIV初筛阳性送检单取阳性血清于专用试管、标识填写HIV初筛阳性样本送检记录样品放入专用套桶并放入专用保温箱送确诊实验室人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测

1．从冰箱中取出的试剂盒应至少在室温平衡30min以上。2．每次实验前试剂最多可添加试剂槽的3／4的量，添加时应小心，防止试剂砰溅导致试剂污染。3．整个实验过程中应严格遵守仪器和项目操作规程进行操作，不得擅自离岗。【质量控制】人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测

原理应用双抗体夹心酶联免疫吸附实验原理。在微孔板预包被纯化乙肝表面抗体（抗-HBs），加入待检样本，同时加入酶标记乙肝表面抗体（HBsAb-HRP）进行温育，样本