病理检验技术（第3版）课件 第6章 组织制片技术 .pptx

组织制片技术;;;我们将切片制作所采用的一系列技术，称为组织病理学技术或病理组织制片技术。

病理组织制片技术一般包括以下基本技术流程：

取材、固定、洗涤、脱水、透明、浸蜡（透蜡）、包埋、切片、展片、贴片、烤片、染色、封片等。;;按照病理检验的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程称为取材。?

（一）取材的配合

病理检验技术员取材时的职责是：配合病理医师对病变组织进行肉眼检查，准确记录病理医生检查时描述的病理改变，按照病理检验的需要，选择和确定取材的部位和块数。?

病理检验技术人员要及时对切取的组织进行编号或标记，并在病理送检单上做好记录，以便病理医生镜检时核对。取材后的标本应加足固定液，按编号存放，以备复查之用。

;（二）注意事项

1.避免组织结构变形

2.组织块大小适当

3.及时取材

4.标明包埋方向

5.染色、包裹小标本

6.充分暴露病灶

7.确定取材部位

8.清除多余组织

9.重复取材（补取）?

10.认真核对

?;;将组织浸入某些化学试剂，使组织细胞内所含物质尽量保持在生活状态时的形态结构和位置的过程，称为固定。

所使用的化学试剂称为固定液。

（一）固定目的

1.防止自溶和腐败

2.凝固或沉淀细胞内物质

3.硬化组织

4.增加组织的折光率

;常用固定方法有以下几种。

1.浸泡固定法将标本直接放入固定液中进行固定的方法，称为浸泡固定法。

2.注射、灌注固定法将固定液注射或灌注到血管或腔道内，使组织、器官被充分固定的方法称为注射、灌注固定法。注射固定法常用于体积过大组织的固定，而灌注固定法则用于整个脏器或尸体的固定。

3.微波固定法将组织块浸入固定液，置于医用微波仪内，在微波的作用下加速组织固定的方法，称为微波固定法。

4.蒸汽固定法用固定液加热后产生的蒸汽对组织进行固定的方法，称为蒸汽固定法。主要用于可溶性物质、小而薄的标本、膜性组织及血液或细胞涂片的固定。常用的固定液有甲醛、三聚甲醛和锇酸等。;（三）常用固定液

一种好的??定液，应具有以下特性：

①渗透力强，能迅速渗入组织内部；

②不会使组织过度收缩或膨胀；

③能硬化、固化组织，使细胞成分的形态和位置与生活状态时相似；

④使组织对染料产生较强的亲和力，并产生较佳的折光率。;固定液可分为单纯固定液和混合固定液两类。

单纯固定液

是指由一种化学物质组成的固定液。此类固定液包括：甲醛、乙醇、乙酸、重铬酸钾、苦味酸、丙酮、氯化汞、铬酸、锇酸等，

2.混合固定液是指由多种化学物质混合组成的固定液。

（1）中性甲醛液：免疫组化最常用的固定液。固定时间一般为6～24小时。此液中甲醛的浓度为6%-8%。

配方：40%甲醛150～200ml

磷酸二氢钠4g

磷酸氢二钠13g

蒸馏水800～850ml

（2）乙醇-醋酸-甲醛液（AAF液）：AAF液兼有固定和脱水的作用，经过AAF液固定后的组织块可直接移入95%乙醇进行脱水。

配方：95%或无水乙醇85ml

醋酸5ml

40%甲醛10ml;（3）乙醇-甲醛液（AF液）：由乙醇和甲醛混合而成，兼有固定及脱水作用，适用于皮下组织中肥大细胞的固定。固定后的组织块不必经低浓度逐级乙醇脱水，可直接移入95%乙醇脱水，也不用水洗，缩短了脱水时间。

配方：95%或无水乙醇90ml、

40%甲醛10ml

（4）Bouin液：是一种常规用于活检标本固定的良好固定液，适用于大多数组织的固定，尤其适用于结缔组织染色。

配方：饱和苦味酸水溶液75ml

40%甲醛水溶液25ml

醋酸5ml

即三者的比例依次为15：5：1。

（5）Zenker液：适用于一般组织固定，胞核和胞质染色均清晰，对免疫球蛋白染色最好，也可用于病毒包涵体、某些肿瘤标本的固定。

配方：重铬酸钾2.5g

氯化汞5g

加蒸馏水至100ml

醋酸5ml（用时加入）;（四）固定的注意事质

1.及时固定

2.固定容器宜大

3.固定液应足量

4.防止组织变形

5.确定恰当的固定时间;;（一）洗涤

组织经