高美华《医学免疫学》补体结合实验.pptVIP

（二）血清标本标本采集后应及时分离血清并尽快检测，否则血清放置-20℃，试验前血清应加热56℃30min灭活补体。三、方法1、取试管5支，标明顺序。2、按表依次加入病人血清、抗原、补体、生理盐水摇匀。3、放37℃水浴箱中水浴30min。4、取出加入溶血素和绵羊红细胞，摇匀。5、再放入37℃水浴箱中水浴30min，取出观察结果50%溶血试验（50%complementhemolysis,CH50）测定血清总补体活性实验原理补体最重要的活性是溶细胞作用。特异性抗体与红细胞结合可激活补体引起溶血，溶血程度与补体的活性相关。溶血反应对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线，该曲线在30%~70%之间最陡，几乎呈直线，即此阶段对补体量的变化非常敏感，因此实验常以50%溶血作为判断终点来测定血清总补体活性，这一方法称为补体50%溶血实验（CH50）。试剂绵羊红细胞（SRBC）：无菌采静脉血，除去纤维蛋白后，洗涤配成2%浓度应用。溶血素：抗绵羊红细胞抗体，需提纯后灭活补体。用稀释缓冲液稀释至2单位。稀释缓冲液：PH7.4巴比妥缓冲液三、方法1、待检标本的处理：取试管一支加待测血清0.20ml，加入3.80mlpH7.4巴比妥缓冲液，使血清为1：20稀释。2、取1列10支试管，从1~10编号，第1~9为测定管，第10管为对照管。按表进行加样。3、50%溶血标准管全溶管：2%SRBC1ml+4ml蒸馏水混匀静置10min50%溶血管：2ml全溶管液体+2mlpH7.4巴比妥缓冲液。4、上述所有试管经2500rpm，离心5min后，与50%溶血管肉眼初步比较，取较接近的2管进行比色，确定最接近50%溶血管的管号。结果判断：根据最接近50%溶血管的管号，查出该管所加待检血清标本量，按下列公式计算：CH50（U/ml）=1/50%溶血管的血清用量（ml）×稀释倍数正常范围：50~100U/ml补体结合试验

（complementfixationtest，CFT）原理Ag和相应Ab反应所形成的免疫复合物（IC）能吸附（固定）并激活补体。5种成份分属于：⑴反应系统；⑵补体系统；⑶指示系统。反应、指示系统竞争结合补体系统。先加入反应系统，优先结合补体。若反应系统中待测的Ab（或Ag）与已知Ag（或Ab）相对应，则Ag与Ab形成IC后可结合补体；再加入指示系统时，因已没有游离的补体而不出现溶血，为补体结合试验阳性。若不相对应，将会有游离的补体参与指示系统的反应，最终会出现溶血现象，为阴性。补体结合试验图示受检系统指示系统溶血反应补体结合试验1、仅有抗原或抗体补体红细胞溶血素阳性阴性2、抗原抗体反应红细胞溶血素阴性阳性抗原抗体补体抗原/抗体试剂受检抗原、抗血清（56℃30min灭活，1:50稀释）。补体（豚鼠新鲜血清，2u）、1%绵羊红细胞（SRBC）、溶血素（2u）。生理盐水、试管、吸管、水浴箱等。单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。正如我们都希望改变世界，希望给别人带去光明，但更多时候我们只需要播下一颗种子，自然有微风吹拂，雨露滋养。恰如其分地表达观点，往往事半功倍。当您的内容到达这个限度时，或许已经不纯粹作用于演示，极大可能运用于阅读领域；无论是传播观点、知识分享还是汇报工作，内容的详尽固然重要，但请一定注意信息框架的清晰，这样才能使内容层次分明，页面简洁易读。如果您的内容确实非常重要又难以精简，也请使用分段处理，对内容进行简单的梳理和提炼，这样会使逻辑框架相对清晰。方法单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。正如我们都希望改变世界，希望给别人带去光明，但更多时候我们只需要播下一颗种子，自然有微风吹拂，雨露滋养。恰如其分地表达观点，往往事半功倍。当您的内容到达这个限度时，或许已经不纯粹作用于演示，极大可能运用于阅读领域；无论是传播观点、知识分享还是汇报工作，内容的详尽固然重要，但请一定注意信息框架的清晰，这样才能使内容层次分明，页面简洁易读。如果您的内容确实非常重要又难以精简，也请使用分段处理，对内容进行简单的梳理和提炼，这样会使逻辑框架相对清晰。溶血素效价的滴定