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饲料及其原料中尿素检测方法的研究进展

尿素是动物蛋白质补充料中应用的主要非蛋白氮物质。使用尿素一方面可以补

充蛋白质饲料的不足；另一方面还能减少鱼粉等蛋白质类饲料的使用量，降低饲养

成本。基于动物利用尿素的机理，一般主要将尿素用于反刍动物的养殖，且有较为

严格的剂量添加要求，通常尿素在奶牛和羊精料补充料中的添加量不超过1.0%，肉

牛精料补充料中添加量不超过1.5%（杨红东等，2009）。当前报道中，关于尿

素的检测方法较多，但主要应用在临床诊断、环境监测等领域。关于饲料及其原料

中尿素的检测方法主要集中在对二甲胺基苯甲醛法(DMAB)的应用与改良。除此之外

还有二乙酰肟法、甲酚红法、脲酶波氏法和近红外光谱法(NIS)等。本文仅就当前关

于饲料及其原料中尿素检测方法的研究进行综述，以期为进一步完善和统一饲料中

尿素的检测标准提供参考。

1DMAB法

目前多数文章及标准中均使用DMAB法检测饲料或原料中的尿素，例如，

SC/T3510-1996、GB/T19164-2003、AOAC941-2004、IS06654-1991等。该方法的

原理为DMAB与尿素反应，生成黄色的对二甲胺基甲醛脲，此物质的颜色深度与溶液

中尿素含量成正比，因此可以通过测定在一定波长下反应溶液的吸光值来定量溶液

中的尿素浓度，该反应需要在酸性条件下进行。

从相关报道来看，此方法在应用中主要涉及两方面：饲料样品的前处理和与DMAB

试剂的反应。综合各方文献，样品前处理所采用的方法基本相同，即使用木炭作为

吸附剂吸收饲料溶液中的色素，防止溶液浑浊对后续反应吸光值的测定产生干扰；

利用乙酸锌和亚铁氰化钾反应生成亚铁氰酸锌来共沉淀样品中的蛋白等潜在干扰物

质。大多研究者指出溶液中加入样品及试剂后摇匀静置20min左右，待沉淀完全即

可过滤，而武金凤等(2008)报道，应用此方法处理鱼粉样品时，为了使尿素完全提

取，还需要将溶液振荡30min再静置至沉淀沉积，这与ISO(1991)、崔淑文和马车

覆(1993)的方法基本相同。根据笔者的经验，从实验结果的可靠性来考虑，实际样

品测定中应用先振荡后静置的操作过程能够较好保证测定结果的准确性，减少可能

由于提取引起的误差。样品经过前处理后，即可从中取适量上清液加入试管中与一

定量DMAB显色剂进行反应，在这一操作中需要考虑的问题主要是待测样品液的取样

量和反应温度，其中取样量与样品中的尿素浓度和反应体系的测定范围有关。翟毓

秀(1993)报道，样品经过前处理，尿素含量在1%以下取15mL、1%以上取5mL加入

25mL反应管中，然后加水至18mL，再加入5mLDMAB试剂用水定容，室温放置10

min，在420nm波长下测定溶液吸光值。崔淑文和马车覆(1993)报道，鱼粉样品经

过前处理后直接取5mL滤液于试管中，加5mLDMAB溶液，充分振摇后置于25℃水

浴中10min，取出即可于420nm波长下测定反应溶液的吸光值。武金凤等(2008)

在实验中吸取含氮量为0.2~10mg的滤液5-10mL加入25mL反应管中，再加5mL

DMAB溶液，用水定容至刻度后混匀放置20min,实验结果表明，反应溶液在25℃水

浴和常温条件下放置20min，测定结果无显著性差异。

杨珩和吴玉生(1997)还提出了一种简单、快速的试纸条定性、半定量测定法，

该方法应用预先经10%硫酸氢钾和2%DMAB溶液浸泡制备的试纸条，将其插入样品溶

液中（此样品溶液无需加入木炭、乙酸锌与亚铁氰化钾处理），根据2rain内试纸

条颜色的变化即可定性溶液中尿素的有无（试纸条呈黄色即为尿素阳性），其检出

限为0.01%：而将测定后的试纸条与已知尿素浓度下的试纸条颜色进行对比即可实现

样品溶液中尿素的半定量。

DMAB法虽然较为常用，但由于其试剂本身在420-436nm具有较高的吸收值，

所以操作过程中要严格控制显色剂的加入量，一般推荐添加试剂5mL。陈灵华(1998)

指出。试剂空白吸收程度随测定波长的增大而下降，同样波长下样品吸光值的变化

则不大，所以推荐可以使用440nm作为测定波长，这样就可以尽量减少由于试剂添

加量变化而引起的误差，从武金凤