SDS-PAGE电泳法测定蛋白质分子量.pptx

实验七

SDS电泳法测定

蛋白质分子量;实验目的;实验原理;2、当蛋白质的分子量在15000～200000之间时，电泳迁移率与分子量的对数值呈直线关系，符合下列方程：

㏒10Mr=－b·mR+K

（式中：Mr为蛋白质分子量，mR为相对迁移率，b为斜率，K为截距。在条件一定时，b和K均为常数。）

若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标准曲线。未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。;实验试剂;（2）凝胶试剂;（3）10×电极缓冲液（pH8.3）;（5）染色液;实验器材;实验步骤;A液（分离胶缓冲液）;3.制备浓缩胶：(7.55ml);4.凝胶液的灌注和聚合

用移液枪将所配制的分离胶缓冲液沿着凝胶腔的长玻璃板的内面缓缓注入，然后加满蒸馏水。20min后，待分离胶凝固，倒出蒸馏水，用滤纸吸干，加浓缩胶，将梳子插入胶液顶部,20min凝固。;;6.电泳：;7.剥胶：

电泳结束后，取下凝胶膜，卸下凝胶膜上的橡胶框，用镊子将短玻璃撬开后取出凝胶板。

;8.染色：

弃去固定液，加入染色液。染色15min。

9.脱色：

染色完毕，倾出染色液，换2～3次脱色液，脱色一昼夜。

10.观察：

11.绘制标准曲线，求待侧样牛血清白蛋白的分子量。

;思考题

1、利用SDS-聚丙烯酰胺电泳法测定蛋白质的分子量与利用凝胶层析测定蛋白质的分子量有何不同？

2、SDS在该电泳方法中的作用是什么？

;结束！