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为天地立心，为生民立命，为往圣继绝学，为万世开太平。——张载
1.形态和培养特征观察
采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h,并进行革
兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。染色方法参照微生物鉴定实验指导
2.生长条件实验
(1)耐盐性实验(NaCl浓度:0.85、1.20和1.71)(mol/L)。
(2)耐酸碱实验(pH:4.3、5.7、6.8、8.4、8.6和8.7)。
(3)温度梯度实验(温度:10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃)。
分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48h,记录生长状况。
3.生理生化实验
⑴过氧化氢酶测定
将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的
载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反
应。
⑵葡萄糖产酸产气实验
在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示
剂,在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h,经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒
管内出现气泡,表示产气。
⑶淀粉水解实验
接种新鲜的菌种于含有0.5g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时
取未接种的培养液作对照,分别在其中加入卢哥氏碘液.不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝
紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。
⑷明胶液化实验
将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。将接种的和
未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。如
对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应
为天地立心，为生民立命，为往圣继绝学，为万世开太平。——张载
⑸甲基红（M.R）实验
接种实验细菌于PYG培养基，于37℃培养2天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液，
如呈红色，表示阳性。
⑹乙酰甲基甲醇V-P实验
接种新鲜的实验菌种于培养基中,37℃培养2天后,取培养液1mL在其中
加入1ml10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。数小时后，培养基表面的
下层出现红色者，为阳性
⑺柠檬酸盐
取幼龄菌种接种于柠檬酸盐斜面培养基上，适温培养3－7天，培养基呈碱性（蓝色）者为
阳性反应，不变者则为阴性
⑻酪素水解实验
牛奶平板的制备：取5g脱脂奶粉加入50mL蒸馏水中（或用50mL脱脂牛奶），另称1.5g
琼脂溶于50mL蒸馏水中，将两液分开灭菌。待冷至45－50℃时，将两液混匀倒平板，即
成牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上，每皿可点接3
－5株菌。适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。配制该
培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固
⑼厌氧生长测定
将菌种接入营养肉汤平板后,用密封带包好放入CO2培养箱37℃培养2天后,观察生长情况,
生长则为阳性
(10)厌氧硝酸盐产气
接种封油：以斜面菌种用接种环接种后，用凡士林油（凡士林和液体石蜡为1:1）封管，封
油的高度约1厘M。必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。
观察结果：培养2－7d，观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。如有气泡产生，
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