特殊毒性及其试验与评价方法.ppt

******Ⅱ阶段试验从着床到硬腭闭合期间染毒研究对成年雌性生殖功能、胚胎发育、器官形成期的发育毒性第31页,共61页，星期六，2024年，5月Ⅲ阶段试验从着床到幼仔断乳期间对孕（乳）母染毒从着床到子代性成熟的母体生殖毒性（妊娠、分娩和哺乳）和子代的发育毒性（胚胎、胎儿生长发育，新生幼仔宫外生活的适应性，断乳前后的生长发育，独立生活能力和性功能成熟）第32页,共61页，星期六，2024年，5月人、大鼠和家兔的致畸作用关键期的比较，短线表示“靶窗”第33页,共61页，星期六，2024年，5月3.发育毒性作用评价发育毒性主要表现为致畸作用，所以发育毒性作用评价主要是评价受试物的致畸作用。第34页,共61页，星期六，2024年，5月通过致畸试验可以确定一种受试物是否具有致畸作用。致畸试验是检查受试外源化学物能否通过妊娠母体引起胚胎毒性或后代畸形的动物试验。胚胎在器官形成期，可因受到化学物或放射性物质的作用，使细胞分化、器官形成和正常发育受到阻滞，以致出现胎仔器官的器质性缺陷而呈现畸形。第35页,共61页，星期六，2024年，5月1.母体效应:受试物对母体产生了损害作用，从而影响了正常妊娠，而不是对胚胎的直接损害。2.胚胎效应:受试物对胚胎的直接损害作用。3.出生前胎儿效应:出生胎儿出现外表或内脏畸形。4.出生后效应:引起子代的生理功能或生理结构的缺陷。如后天生长发育或生殖功能受影响。致畸作用包括：第36页,共61页，星期六，2024年，5月受试动物接触外源化学物的方式与途径应与人体实际接触情况一致，一般多经口给予，雌鼠妊娠的第7～15天染毒，常用灌胃方式。试验期间每2～3天称取孕鼠体重。通过体重变化可观察受试动物的妊娠情况和胚胎发育情况。受孕鼠的体重如持续增长，则表示妊娠过程及胚胎发育正常；如体重停止增长或下降，可能由于受试物的毒性作用或母体的其它原因，引起胚胎死亡或流产。第37页,共61页，星期六，2024年，5月传统常规致畸试验（1）动物选择（2）剂量分组（3）动物交配处理（4）胎仔检查（5）数据处理（6）结果评定第38页,共61页，星期六，2024年，5月（1）动物选择致畸试验的动物选择，除参照毒性试验中选择动物的一般原则（食性和对受试物代谢过程与人类接近，体型小，驯服，容易饲养和繁殖及价廉）外，还应特别注意妊娠过程较短、每窝产仔数较多和胎盘构造及厚度与人类接近等特点。第39页,共61页，星期六，2024年，5月根据上述原则综合考虑，致畸试验可选用二种哺乳动物，一般首先考虑大鼠，此外可采用小鼠或家免。大鼠受孕率高，每窝产仔8～10只，易于得到足够标本数；而且经验证明，大鼠对大多数外来化合物代谢过程，基本与人类近似，故可首先考虑。小鼠自然畸形发生率较大鼠高，但低于家兔，对形成腭裂的致畸物更较敏感。家兔为草食动物，与人类代谢功能差异较大，妊娠期不够恒定，有时延长至36天，自然畸形发生率也较高。第40页,共61页，星期六，2024年，5月（2）剂量分组致畸试验中剂量分组的一般原则是一方面要求出最大无作用剂量，以及引起致畸的阈剂量，同时还要保持母体生育能力，不致母体大批流产和过多胚胎死亡，也应避免较多母体死亡。第41页,共61页，星期六，2024年，5月高剂量组：LD50的1/5或1/3。原则是引起母体轻度中毒，死亡率10%;低剂量组：LD50的1/30～1/100。原则是不引起母体的任何中毒症状。中剂量组：在高、低剂量之间成等比关系。原则是只引起母体极轻微毒性反应。或者以实际接触量为低剂量，以其10倍量为高剂量。第42页,共61页，星期六，2024年，5月（3）动物交配处理将性成熟雌雄动物按雌雄l︰1或2︰1比例同笼交配。每日将已确定受孕雌鼠随机分入各剂量组和对照组。第43页,共61页，星期六，2024年，5月由于致畸作用有极为明确的敏感期，应精确掌握动物接触受试物的时间，必须在器官发生期。如提前在着床前接触，将影响受精卵的着床。如在胚胎发育的最初阶段，例如裂卵期和囊胚期接触受试物，往往可使胚胎死亡，不能造成畸形。如在器官发生期以后接触受试物，则各种器官已发育成熟，致畸作用不易表现。只有器官发生期的胚胎，对致畸物最为敏感，易于出现畸形。第44页,共61页，星期六，2024年，5月接触受试物的方式与途径应与人体实际接触情况一致，一般多经口给予。也可采用灌胃方式，以保证剂量准确，效果较混入饲料喂给为好。在特殊情况下，也可采用腹腔注射法，效果与经口近似。第45页,共61页，星期六，2024年，5月试验期间每2～3天称取母