2025版高考生物二轮复习课件 第一部分 专题九 争分点突破1 PCR技术与应用.pptx

PCR技术与应用;一核心提炼;二典例突破;一、PCR技术“引物”归类分析

1.引物的设计

(1)(2020·山东，25节选)通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出Wx基因的cDNA，原因是___________________________________________

____________________________________。;(2)(经典高考题节选)设计引物时需要避免引物之间发生_____________，而造成引物自连。同理也要避免引物之间的互补。复性温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同且____________的引物需要设定更高的复性温度。;(3)科学设计引物是PCR能否成功的关键，若引物的碱基过多或引物的G、C含量过高，会造成PCR的效率偏低，收获的目的基因较少，原因是_______________________________________________________________。

若对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，结果发现有两个或多个条带，从引物角度分析，原因可能是_____________________________。;拓展引物与复性温度

(1)复性温度：复性温度高，扩增特异性强；复性温度低，扩增效率高。

(2)引物：①引物长度越长，越容易形成氢键，为避免出现错配，需要适当提高复性温度；

②引物GC含量越高，容易出现非特异性结合，需要适当提高复性温度。;2.引物的修饰

(1)(2022·山东，25节选)某种类型的白血病由蛋白P引发，蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解，药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理，需构建重组载体以获得融合蛋白FLAG－P和FLAG－PΔ。PΔ是缺失特定氨基酸序列的P，FLAG是一种短肽，连接在P或PΔ的氨基端，使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合，但不影响P或PΔ的功能。

①为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增P基因。用于扩增P基因的引物需满足的条件是____________________________________________

_____________，为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的______(填“3′端”或“5′端”)。;;②PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后，与编码FLAG的序列形成一个融合基因，如图所示，其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。将该重组载体导入细胞后，融合基因转录出的mRNA序列正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正???，但P基因对应的氨基酸序列与P不同。;据图分析，出现该问题的原因是___________________________________

_______________________________________________________________。修改扩增P基因时使用的带有EcoRⅠ识别序列的引物来解决该问题，具体修改方案是__________________________________________。;;(2)引物用PCR技术将DNA分子中的A1片段进行扩增，设计了引物Ⅰ、Ⅱ，其连接部位如图所示，X为某限制酶识别序列。扩增后得到的绝大部分DNA片段是图中的;3.引物的结合方向

如图为X蛋白的部分基因序列，所示序列为引物结合的部分，据图分析：;4.引物的选择

(2023·山东，25节选)科研人员构建了可表达J－V5融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图甲所示，其中V5编码序列表达标签短肽V5。;;(2)重组质粒在受体细胞内正确表达后，用抗J蛋白抗体和抗V5抗体分别检测相应蛋白是否表达以及表达水平，结果如图乙所示。其中，出现条带1证明细胞内表达了_______________，条带2所检出的蛋;;5.引物的数量计算

(1)如图：一个DNA分子n次扩增，则：

①子代DNA分子中等长链的

DNA分子数为________个；

②子代DNA分子中不等长链

的DNA分子数为_____个；

③子代DNA分子中含模板链

DNA分子数为_____个；

④子代DNA分子中含引物A(或B)的DNA分子数为________个；

⑤复制过程中共需引物________个；

⑥第n次复制需要引物______个。;(2)已知引物1及引物2之间的序列为目的序列，若引物与DNA的结合位点如图所示，在第_____轮循环产物中开始出现两条单链等长的目的片段。;二、PCR产物鉴定——琼脂糖凝胶电泳

(2024·黑吉辽，7)关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是

A.琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的