实时荧光定量PCR检测凡纳滨对虾和罗氏沼虾卵黄蛋白原mRNA在卵巢和肝胰腺中的表达.pdf

第36卷第11期水产学报V_01．36．No．11

2012年11月JOURNALOFFISHERIESOFCHINANOV．．2012

文章编号：1000．0615(2012)11．1667．08D0I：10．3724／SP．J．1231．2012．27893

实时荧光定量PCR检测凡纳滨对虾和罗氏沼虾

卵黄蛋白原mRNA在卵巢和肝胰腺中的表达

李媛媛，蔡生力，刘红

(上海海洋大学水产与生命学院，上海201306)

摘要：卵黄磷蛋白作为卵黄蛋白的主要成分，可为甲壳动物胚胎和早期幼体发育提供能量，

为研究其来源及合成规律，实验应用SYBRGreenI荧光定量PCR法检测了凡纳滨对虾和罗

氏沼虾性腺不同发育时期卵巢和肝胰腺两种组织中卵黄蛋白原mRNA的表达水平。结果发

现，凡纳滨对虾和罗氏沼虾的卵巢和肝胰腺中都有卵黄蛋白原mRNA的表达。随着卵巢的发

育，凡纳滨对虾卵巢中卵黄蛋白原mRNA的相对表达量在前5个阶段不断增加，分别为1．1，

5．9，10．4，26．9，85．0，恢复期急剧减少，为1．6。肝胰腺中的相对表达量也不断增加，分别为

1．3，3_3，7．1，37-3，51．6，恢复期急剧减少，为1．0。罗氏沼虾肝胰腺中卵黄蛋白原mRNA的相

对表达量在前四个阶段不断增加，分别为3．4，12．6，15．2，38．9，抱卵期急剧减少，为2．9；而

卵巢在整个发育过程中对卵黄蛋白原合成的贡献比较小，分别为1．0，l_3，1．7，4．8，1．5。研究

表明，两种虾类的肝胰腺和卵巢均具合成卵黄蛋白的功能，而且在不同的卵巢发育阶段呈

现明显的规律性。

关键词：凡纳滨对虾；罗氏沼虾；实时荧光定量PCR；卵黄蛋白原mRNA

中图分类号：Q786；S917．4文献标志码：A

卵黄积累是包括甲壳纲、昆虫纲等节肢动物卵用，而卵巢未见有合成。Yano等[5]通过组织和免疫

母细胞发育成熟的必要前提[1]，也是雌性个体生殖化学的方法研究认为日本囊对虾(Marsupenaeus

周期中的关键阶段I2]。虾类胚胎发育以及对虾类无japonicus)的卵巢是卵黄蛋白的合成场所，而肝胰腺

节幼体完全依赖于卵黄来满足营养需要。卵黄的主合成的蛋白与抗卵黄磷蛋白血清没有沉淀反应，所

要成分是卵黄蛋白，主要由脂肪和蛋白质组成，卵以认为肝胰腺不是卵黄的合成场所。Quackenbush~】

黄磷蛋(vitellin，Vn1又是卵黄蛋白的主要成分。卵通过离体培养的方法研究认为肝胰腺可能是南方

黄磷蛋白是在卵黄发生期，由卵黄磷蛋白的前体一滨对虾(Litopenaeusschmitti)~黄蛋白原的合成部

卵黄蛋白原(vitellogenin，VTG)释放到血淋巴中被卵位。Fainzilber等J【通过离体培养的方法研究认为短

母细胞吸收后加工(主要是糖基化1所形成[3]。沟对虾(Penaeussem~ulcatus)的卵巢是其主要的卵

有关十足目甲壳类卵巢中卵黄的来源，在过黄蛋白原合成场所，处于卵黄合成早期雌体的肝胰

去的几十年研究中一直存在争议，内源性合成和腺也有合成卵黄蛋白原的功能。目前多数研究结果

外源性合成都有报道。Soroka等[4对罗氏沼虾认为卵巢和肝胰腺是十足类的卵黄蛋白合成组织。

(Macrobrachiumrosenbergii)次级卵黄发生期的肝实时荧光定量PCRfreal—timefluorescence

胰腺和卵巢进行离体培养发现，肝胰腺有合成作quantitativePCR)技术于1