酶细胞化学摘要.PPTVIP

第二部分

细胞化学技术

cytochemistry

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细胞化学技术是在保持细胞结构完整的条件下，借助细胞中的化学反应在原位确定化学成分的分布及这些成分在细胞活动中的动态变化的技术

细胞化学是组织化学和细胞化学的统称

（组织化学强调光镜水平的应用）

（细胞化学强调在电镜水平的应用）

细胞化学技术包括：酶细胞化学技术

免疫细胞化学技术

原位杂交技术

放射自显影技术等;第五章酶细胞化学技术;

细胞器标志酶

内质网核苷二磷酸酶葡萄糖-6-磷酸酶

高尔基体焦磷酸硫胺素酶烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酶

溶酶体酸性磷酸酶

微体过氧化氢酶

线粒体细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢酶

细胞膜核糖核苷磷酸酶（ATP酶）、碱性磷酸酶;

一些疾病由于缺乏某种酶而使细胞内某些物质不能被消化，这些物质大量堆积在细胞内,使细胞和组织的正常功能受到障碍。常见的如：贮积病、I-细胞病、矽肺等

贮积病

是由于遗传缺陷导致先天性缺乏某种溶酶体酶,结果与酶相应的底物不能被消化而贮留在细胞内目前已知有40多种先天性贮积病.多数是粘多糖和糖脂在组织中贮积

I型糖原累积病是一种葡萄糖6-磷酸脂酶缺陷所引起的代谢性疾病,主要病理变化是肝细胞内大量糖原颗粒堆积;第一节酶细胞化学原理

一、酶反应特异性和酶的定位

二、酶细胞化学反应

三、酶和底物

四、捕捉反应

第二节酶细胞化学方法

一、样品制备

二、基本实验过程

三、一些关键问题

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酶反应的特异性：酶反应的特异性是它的底物特异

性，即酶只作用于它特有的底物

酶的定位：酶存在的特定部位称为酶的定位

二、酶细胞化学反应

酶细胞化学的原理是：在一定条件下，使组织细胞内的酶作用于其底物，再将酶反应的产物作为反应物质，在酶的作用部位进行捕捉，形成显微镜下可见的最终反应产物，从而间接地使酶可见，以证明酶在细胞和细胞器水平的定位;

(1)

酶反应相当于细胞内自然条件下发生的酶促反应

捕捉反应为了使酶反应可见而人为造成;

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初级反应：底物被磷酸水解酶作用后分解产生磷酸

磷酸水解酶

底物→→→→→→→→→→H3PO4

最终反应：磷酸与金属捕捉剂结合形成反应产物磷酸铅

（高电子密度）

捕捉剂（Pb2+）

H3PO4→→→→→→→→→→Pb(PO4)2

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１.联苯胺色素法和嗜锇物质生成法

氧化酶作用于两种底物（供氢体和受氢体）

供氢体为二氨基联苯胺(DAB)，经一系列氧化聚合反应后形成联苯胺氧化聚合物，在光镜下呈棕黄色

DAB嗜锇性很强，经锇酸固定后能生成具有高电子密度的锇黑;;２