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实验设计:局部化脓性炎症病原菌的分离鉴定及敏感药物筛选

小组成员：范子文孙琦黄必胜雍之瑶【实验病例】

刘正春，男，38岁，建筑工人，上班时被石头砸断了胳膊，由于长时间不接受正规治疗，

他的胳膊上的伤口感染开始化脓，发热1天，伤口肿胀疼痛

体检：体温39℃，伤口局部红肿，有黄色粘稠脓汁

血象：血白细胞12x109/L，中性粒细胞80%，淋巴细胞28%。要求：

1脓汁标本病原菌的分离和鉴定；选择敏感抗生素治疗2

【实验目的】掌握病原菌的分离和鉴定，掌握化脓性细菌的主要特点选择合理的敏

感抗生素进行治疗

【设计思路】

球菌是细菌中的一个大类，根据格兰染色的不同，可分为革兰阳性和革兰阴性两类。阳性：

葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、肠球菌等阴性：脑膜炎球菌、淋球菌等

病原性球菌中常引起人类化脓性疾病的细菌，又称为化脓性球菌。上述细菌均为化脓性球菌，

它们形态、培养上各有特点，可供鉴别。

所可能用到的检查方法：染色镜检、分离培养、生化反应、血清学实验、动物接种。所以，

我们小组的实验设计即围绕取样，检查，确定，选用抗生素治疗的主线流程，结合上述检查

方法，最终确定出引起患者化脓的致病菌并治疗。

【初步观察】

在病例中，患者的明显体征为伤口局部红肿，有黄色粘稠脓汁，根据金黄色葡萄球菌的致

病特点，在发生局部感染时，皮肤化脓感染的特点是脓汁粘稠，病灶局限，界限清楚。其中

患者黄色粘稠脓汁与此特征相符，初步怀疑为金黄色葡萄球菌，需要进一步检验。

肺炎球菌多导致呼吸道炎症，大叶性肺炎，与胳膊外伤无关，可排除。肠球菌所致感染中

常见的为心血管系统感染和尿路感染，可以排除。脑膜炎球菌主要有呼吸道感染转变为菌

血症或者败血症，可以排除。淋球菌引起人类泌尿生殖系统急慢性化脓性感染，可以排除。

所以实验的目的为分辨引起患者伤口化脓的细菌是葡萄球菌还是链球菌，或者二者兼有。

【标本采集】

在本病例中，患者为伤口感染化脓，即开放性脓肿，所以我们采取标本的方法为：用无菌

棉拭采取脓液及病灶深部分分泌物。

采集患者的血液标本，检测病人有无菌血症或者败血症。关于标本采集的一些备注，参

见附录

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【染色镜检】

将浓汁直接涂片，用格兰染色观察细菌形态、排列及染色性，根据结果特点初步判断。

成单个、成双、四连体或短链排列可能为葡萄球菌属革兰阳性

链状排列，短链状或双球状可能为链球菌属

由于成双或者成短链状排列为二者共有的排列特性，所以在这个步骤不能鉴别出病原菌。

【分离培养】采集标本，使用三区划线法在普通平板和血琼脂平板上分别进行病原菌的分

离培养，观察菌落特征。

在普通琼脂平板上形成直径约1~2mm的圆形，隆起，表面光滑，有光泽，边缘

整齐的菌落，可能会产生不同的颜色，如金黄色，白色或者柠檬色等，此菌落

即为葡萄球菌属菌落，致病性葡萄球菌可以在血琼脂平板上形成溶血环

菌落

特性在血琼脂平板上形成灰白色、表面光滑、边缘整齐、直径0.5~0.75mm的细小

菌落，可能会产生一定的溶血现象，则此菌落为链球菌属。

若两种菌落都有出现，那么病原菌即为混合菌。

【实验检测】触酶试验

取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3％H2O21滴，立即观察结果。葡萄球菌属细菌

为阳性，链球菌属细菌为阴性。

凝固酶实验

使用玻片法做凝固酶实验，若结果为阳性，则病原菌为致病性葡萄糖菌属。

甘露醇发酵试验

取可以菌落接种于甘露醇发酵管中，37℃破诶杨18~24h，金葡菌能分解甘露醇，产酸不产

气。

【防治治疗】

一．若致病菌为葡萄球菌属，根据菌落颜色可以确定具体细菌，然后进行敏感性实验。

敏感性试验

1．扩散法琼脂加上细菌所需要的各种养料，将培养基融化后，倒入无菌培养皿中，冷却，

凝成一个平面或叫平板（平皿），这时将含有少数细菌的菌液涂到平板上，培养后细菌就会

分别在平皿上裂殖，如果在平皿的培养基内事先加入抗生素纸片，由于药物在培养基中扩散，

起了抑（杀）菌作用，形成了不长菌落的抑制圈，抑制圈的大小，反映某一抗生素对该菌抑

菌的程度，

2．稀释法常用药敏稀释法可分试管稀释法，琼脂稀释法两种：（1）试管稀释法先将测试

抗菌药物作一系列倍比稀释，然后各试管加入适当稀释的试验菌液，摇匀，经培养后观察，

以抗菌药物最