测定α淀粉酶活力的方式.pdfVIP

实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的阻碍

一、目的要求通过实验加深对酶性质的熟悉，了解测定α-淀粉酶活力的方式。

二、实验原理

酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。酶催化的反应称为酶促反应。生物催化剂催

化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等

特点。

能提高酶活力的物质，称为激活剂。激活剂对酶的作用有必然的选择性，其种类多为无机离子和简单的有

机化合物。使酶的活力中心的化学性质发生转变，致使酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。氯离

子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时

为某种酶的激活剂，而在高浓度时那么为该酶的抑制剂。如氯化钠抵达约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。

酶促反应中，反应速度抵达最大值时的温度和PH值称为某种酶作历时的最适温度和PH值。温度对酶反应

的阻碍是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不

断升高，而使酶慢慢变性从而使反应速度降低。一样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的双

侧活性骤然下降，其转变趋势呈钟形曲线转变。

食物级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，要紧由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉

等微生物产生。但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，和产物的性质

等均有不同。α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地

将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应慢慢消失，这种作用称为

液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解

产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。

本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精〔少于6个

葡萄糖单位〕遇碘不显色的呈色反应，来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解进程，从而了解酶的性质和动力

学参数。

三、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活力的阻碍

〔一〕试剂及材料

一、1：30唾液淀粉酶配置用蒸馏水漱口，1min后搜集唾液，以1：30倍蒸馏水稀释。

二、%可溶性淀粉称取可溶性淀粉，预加20mL蒸馏水调匀，然后倒入80mL滚水中，继续煮沸至溶液透明，

冷却后补水至100mL。

3、1%NaCl溶液称取g氯化钠，加水溶解稀释至100mL。

4、1%CuSO溶液称取g硫酸铜，加水溶解稀释至100mL。

4

五、标准稀碘液称取11g碘，22g碘化钾，置研钵中，参加适量的水研磨至碘完全溶解，并加水稀释定容

至500mL。吸取2mL上述碘液，参加10g碘化钾，用水稀释至500mL。

〔二〕仪器设备电热恒温水浴锅。

〔三〕操作方式

取试管3根，编号后按下表配置实验样液。

试管%可溶性淀1%NaCl1%CuSO蒸馏水混匀，放入1：30唾液淀粉酶

4

序号粉37℃水浴中

1mLmL//保温10min。mL

2mL/mL/立即参加唾mL

3mL//mL液淀粉酶。mL

用点滴管并非断从试管中吸取样液于比色白瓷板，用稀碘液查验试管内淀粉被淀粉酶水解的程度，记录各

试管内样液遇碘不显蓝色的前后顺序，说明实验现象的缘故。

四、温度与PH值对α-液化淀粉酶活力的阻碍

〔一〕试剂与材料

一、2%可溶性淀粉溶液称取可溶性淀粉〔预先在105℃烘干〕，预加20mL蒸馏水调匀，然后倾入80mL滚水

中煮沸至溶液透明，冷却后定容至100mL。

二、、、、、磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲溶液

〔1〕mol/mLNaHPO4称取，用水溶解定容至100mL。

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〔