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红细胞悬液配制、abo、rh血型鉴定讲稿

实验一红细胞悬液配制、ABO、Rh血型鉴定一、红细胞悬液配制:

【实验目的】

掌握5%红细胞悬液配制的方法

【实验原理】

用一定量的生理盐水稀释红细胞达到一定浓度。因为在抗原与抗体特异性结合

中遵循一定的量比关系，只有两者比例适当才会出现最佳反应结果。

【器材】试管、吸管、离心机

【试剂】生理盐水

【标本】抗凝全血

【实验步骤】

1.抗凝全血2ml(0.2ml枸橼酸钠+1.8ml血)，2500r/m离心5min，分离

出血浆至一干净试管。

2.剩余红细胞加NS约5ml，混匀，2500r/min，离心3min，弃上清。重复

操作3次，末次离心5min，得到压积红细胞。

3.配制不同浓度的红细胞悬液

悬浮RBC浓度20%10%5%2%1%压积RBC(滴d)1d1d1d1d1d

NS0.2ml(4d)0.4ml(8d)0.8ml(16d)2ml(40d)4ml(80d)

悬浮RBC浓度3%2%1%

10%RBC悬液1d1d1d

NS(滴)约3(d)4(d)9(d)

二、ABO血型鉴定

【实验目的】掌握ABO血型正、反定型的基本操作方法及结果判定【实验原

理】

已知血型特异性的抗体试剂鉴定红细胞的抗原[正定型、红细胞定型]，同时用

已知血型的试剂红细胞鉴定血清中的抗体[反定型、血清定型]，根据正反定型结果

判定血型。

【实验仪器与试剂】

1(滴管、洁净小试管、记号笔、离心机、显微镜等。

2(试剂单克隆或多克隆的抗A;单克隆或多克隆的抗B;抗A，B;

2,,5,的A型、B型和O型红细胞生理盐水悬液。

【实验步骤】

1(正定型(红细胞定型)

(1)取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，抗A，B(可选)，用滴管分别加

入抗A、

抗B和抗A，B定型试剂各l滴于试管，再分别加入受检者的2,,5,红细胞盐水

悬液1滴，轻摇混合。

(2)以3000rpm(900到1000×g)离心15s。

(3)轻摇试管使细胞扣悬起观察有无凝集及溶血现象并记录正定型结果。

2(反定型(血清定型)

(1)取洁净小试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血清2滴

于试管，

,,5,A(、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。再分别加入2

(2)以3000rpm(900到1000×g)离心15s。

(3)轻摇试管使细胞扣重悬后观察有无凝集及溶血现象并记录反定型结果。

【实验结果】

ABO血型判定应综合正反定型结果，判断方法见表。

抗A血清抗B血清A细胞B细胞O细胞血型

+--+-A

-++--B

--++-O

++---AB

【注意事项】

1(观察结果时若试管中出现溶血现象(须排除外源性溶血的干扰)，表明存在抗

原抗体

反应并激活了补体，应视为阳性结果。

2(在记录血型结果之前必须要解释任何AB0血型鉴定出现正、反定型不一致情

况。

ABO血型鉴定正、反定型不一致情况既有技术问题，也有标本红细胞或血清本

身的

问题，初步的处理程序主要有以下一些。

(1)相同的血液样本重复ABO血型鉴定一次，排除检测技术操作上可能的干

扰。如果

初始的鉴定试验中红细胞悬液为血清或血浆，重复试验中红细胞应改为生理盐

水

多次洗涤后红细胞，以消除因为血浆蛋白或自身抗体引起的干扰。

(2)重新采集一管血液样本鉴定。当ABO血型不一致出现在当前试验结果与历

史检测

记录不一致或怀疑标本交叉污染时，需要重新采集标本进行鉴定。

(3)查阅患者病史评估可能出现改变或干扰ABO血型鉴定的患者疾病状态，包

括:?

医学诊断;?历史血型结果;?输血史;?移植史。

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