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药敏试验方法

药敏试验方法：

K-B法：

1从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，

直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。

2在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁

处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。

3用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，

每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉

拭子涂抹平板的边缘。

4将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，

以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与

平板接触，不应再移动。

5贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链

球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。

6孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手

册比较，作出结果判断。

说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每

一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、

流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B

法.

肺炎链球菌胶乳凝集测定法

1.在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。

2.从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。

3.在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试

剂，用搅拌棒混匀。

4.轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。

5.2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集

为阴性。

注：R3为阳性对照。

药敏纸片的选择

1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科）

头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ）

氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN）

头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM）庆大霉素

（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA）

头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB）

奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头

孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC）

2、铜绿假单孢菌/不动杆菌

妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）

头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟

头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ）左旋氧氟沙

星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦3、金黄色葡萄球菌

苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）

阿米卡星（AN）红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）

万古霉素奥格门丁（AMX/CA）

哌拉西林/三唑巴坦头孢噻吩（CF）

4、肠球菌

氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP）

庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL）5、除肺炎链球菌

外链球菌

氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素

红霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素(CM)

肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测

MH培养基上贴头孢他定，头孢他定/克拉维酸，头孢噻肟/棒酸，

安曲南。

如头孢他定的抑菌圈22mm，安曲南27mm，头孢噻肟

27mm，意味可能有ESBLS产生。

如头孢他定/克拉维酸与头孢他定，头孢噻肟/棒酸与头孢噻肟的

差值

≥5mm，则确证ESBLS产生。

耐药机制。

一代头孢对普通变形杆菌、枸橼酸杆菌、肠球菌、假单孢菌属、

沙雷氏菌属、拟杆菌属无效。第二代头孢对假单孢菌属、不动杆菌属、

沙雷氏菌属、肠球菌无效；肠球菌对头孢类天然耐药。氨基糖甙类抗

生素阿米卡星与庆大霉素不完全交叉耐药。红霉素类