基于SYBR Green实时定量PCR法在抗汉坦病毒药物评价与筛选中的应用.pdfVIP

基于ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ实时定量ＰＣＲ法在抗汉坦病毒药物评价与筛选

中的应用

卫飞凌佳馨李宁李金林陈良君熊海蓉罗凡刘媛媛杨占秋・

【摘要】目的建立一种体内外用于精确评价与筛选抗汉坦病毒药物的方法。

方法以汉坦病毒Ｓ基因，哺乳动物和鼠甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）基因的

保守序列为靶序列，利用Ｐｒｉｍｅｒｖ３．０软件设计三对实时定量ＰＣＲ引

Ｅｘｐｒｅｓｓ

物，建立了汉坦病毒的ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ实时定量ＰＣＲ检测方法，并将其应用到抗汉

坦病毒药物的评价与筛选中。结果将汉坦病毒，哺乳动物和鼠ＧＡＰＤＨ靶基因连

接ｐＧＥＭ—Ｔ载体，构建重组质粒，经过梯度稀释后作为标准品，根据标准品稀释

度与Ｃｔ值的关系，获得扩增效率良好及可信度高的标准曲线。结论该方法可

以用于体内外评价和筛选抗汉坦病毒药物，具有现实指导意义。

【关键词】汉坦病毒；ｑＰＣＲ；抗病毒药物；评价

ｏｆＳＹＢＲＧｒｅｅｎ。’ｂａｒｅｓｅａｌｄｔｉｍｅｆｏｒ

Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｓｓａｙ

ｖｉｒｕｓｉｏｎａｎｄ

ｉ－Ｈａｎｔａａｎｅｖａｌｕａｔ

ａｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓｓｃｒｅｅｎｉｎｇ

Ｆｅｉ

Ｗｅｉ，Ｊｉａ—ＸｉｎＬｉ，Ｊｉｎ—ＬＬｉｎｉ，Ｌｉａｎｇ—Ｊｕｎ

Ｌｉｎｇ，ＮｉｎｇＣｈｅｎ，Ｈａｉ—ＲｏＸｎｉｇｏｎｇ，ＦａＬｕｏｎ，

Ｙｕａｎ—Ｙｕａｎ

Ｌｉｕ，Ｚｈａｎ—Ｑｉｕ

Ｙａｎｇ＊

（ＳｔａｔｅｏｆＡｎｔｉｖｉｒａｌａｎｄＡｎｔｉｔｕｍｏｒ

ｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ

ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙＶｉｒｏｌｏｇｙ：Ｈｅｒｂａｌ

ＳｔａｔｅＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｆｏｎＴｒａｄｉｔｉｏｎＣａｌｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ＆ＩｎｓｔｉｔｕｔｏｆｅＭｅｄｉｃａｌ

ＣｅｎｔｅｒｏｆＦｏｏｄａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎ：ＭｅｄｉＳｃａｌｃｈｏｏｌＷｕｈａｎ

Ｖｉｒｏｌｏｇｙ：ＲｅｓｅａｒｃｈＤｒｕｇ

４３００７１：Ｃｈｉｎａ）

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｗｕｈａｎ

Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｒｅａｌ—’ｔｉｍｅＰＣＲ

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ

ａｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ

ａｓｓａｙ

ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉａｏｎｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｆｏｎａｎｔｉ—Ｈａｎｔａａｖｉｒｎｕｓｉｎｖｉａｎｄ

ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｔｒｏ

ｉｎｙｉＶＯ．ＭｅｔｈｏｄａｎｄＧＡＰＤＨｉｎＧｅｎｅＢａｎｋ

Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ。ｍａｍｍａｉｉａｎ

ｍｏｕｓｅ