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利用流式细胞仪分析细胞存活率细胞周期ROS

流式细胞仪（Flowcytometry）是一种广泛应用于生物医学研究领域

的技术，可用于分析细胞数量、形态、存活率、细胞周期等多个参数。下

面将详细介绍如何利用流式细胞仪来分析细胞存活率、细胞周期和ROS

（ReactiveOxygenSpecies）。

一、分析细胞存活率

细胞存活率是研究细胞毒性或细胞凋亡过程中的重要参数。在流式细

胞仪中，常用细胞染色剂PI（PropidiumIodide）来评估细胞的存活率。

PI是一种能够穿透破损细胞膜并结合DNA的染色剂，可以通过荧光检测

器来测量。

具体操作步骤如下：

1.培养待测试的细胞，并将细胞备样。可以使用PBS洗涤一遍，以获

得单细胞悬浮液。

2.使用细胞培养基或PBS将细胞悬浮液稀释至合适的细胞浓度，通

常在1×10^6-1×10^7cells/mL之间。

3.加入适量的PI染色剂到细胞悬浮液中，一般终浓度为1-10μg/mL。

4.在黑暗条件下，在4°C冷藏室中孵育15-30分钟，避免光照和温

度升高。

5.使用流式细胞仪进行测量。设置PI染色剂的激发波长和检测通道，

根据实验需要选择适当的过滤器。

6.将细胞悬浮液转移到流式细胞仪的样本管中，进行数据采集和分

析。可以设置门控（gating）策略以排除细胞碎片和颗粒物。

通过分析样本中PI染色的细胞数量，可以计算出细胞的存活率。

二、分析细胞周期

细胞周期分析是研究细胞增殖和凋亡机制的一项重要实验。在流式细

胞仪中，通过DNA染色剂染色和分析可以了解细胞的周期分布情况。

具体操作步骤如下：

1.培养待测试的细胞，并将细胞备样。可以使用PBS洗涤一遍，以获

得单细胞悬浮液。

2.使用细胞培养基或PBS将细胞悬浮液稀释至合适的细胞浓度，通

常在1×10^6-1×10^7cells/mL之间。

3.用酒精或细胞固定液固定细胞，一般在-20°C的环境中固定20-30

分钟。

4.将细胞悬浮液进行重悬，使用DNA染色剂（如DAPI）进行染色。

5.在黑暗条件下，在4°C冷藏室中孵育15-30分钟，避免光照和温

度升高。

6.使用流式细胞仪进行测量。设置DNA染色剂的激发波长和检测通道，

根据实验需要选择适当的过滤器。

7.将细胞悬浮液转移到流式细胞仪的样本管中，进行数据采集和分

析。可以设置门控（gating）策略以排除细胞碎片和颗粒物。

通过分析样本中DNA染色的细胞数量的不同峰值，可以推断细胞所处

的不同周期（G0/G1、S、G2/M等）的相对比例。

三、ROS分析

ROS（ReactiveOxygenSpecies）是细胞内的一类活性氧化物质，对

细胞生命活动起着重要作用，但过多的ROS会引起细胞损伤和凋亡。流式

细胞仪可以通过特定的荧光染料来测量细胞内的ROS含量。

具体操作步骤如下：

1.培养待测试的细胞，并将细胞备样。可以使用PBS洗涤一遍，以获

得单细胞悬浮液。

2.使用细胞培养基或PBS将细胞悬浮液稀释至合适的细胞浓度，通

常在1×10^6-1×10^7cells/mL之间。

3.加入适量的ROS染色剂（如DCFH-DA）到细胞悬浮液中，一般终浓

度为5-10μM。

4.在37°C恒温条件下孵育15-30分钟，使细胞能够充分摄取ROS染

色剂。

5.使用流式细胞仪进行测量。设置ROS染色剂的激发波长和检测通道，

根据实验需要选择适当的过滤器。

6.将细胞悬浮液转移到流式细胞仪的样本管中，进行数据采集和分

析。可以设置门控（gating）策略以排除细胞碎片和颗粒物。

通过分析样本中ROS染色剂的荧光强度，可以推断细胞内ROS的相对

含量。

总结：

利用流式细