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高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯

一.实验目的

1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。

2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。

3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。

二.实验原理

高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流

速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离

和分析的一种色谱方法。

在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动

相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统

所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。

定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的

分离度。分离度（R）的计算公式为：

R＝2[t-t]/1.7*(W＋W)

(R2)(R1)12

式中t为相邻两峰中后一峰的保留时间；t为相邻两峰中前一峰的保留

(R2)(R1)

时间；W及W为此相邻两峰的半峰宽。除另外有规定外，分离度应大于1.5。

12

本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增

塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和

壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗

发液等数百种产品中。但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥

着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。待测物性质见表1。

表1色谱柱测试条件

出峰次序样品组成

1邻苯二甲酸二甲酯（DMP）

2邻苯二甲酸二乙酯(DEP)

3邻苯二甲酸二丁酯(DBP)

如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶

液，在不同条件下进行HPLC分离检测。

三.仪器与试剂

1、仪器

Agilent1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。

2、试剂

甲醇（色谱专用），高纯水

四.实验步骤

1、色谱条件

色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶（C）

8

柱温：室温

流动相：初始为高纯水：30％，甲醇：70％

检测器：DAD检测器;

检测波长：220nm；

进样体积：100µl定量环，实际注射每次可控制在200µl。

2、待测溶液的配制

首先用甲醇做溶剂配制储备液：邻苯二甲酸二甲酯（0.3880g/L），邻苯二甲

酸二乙酯（0.2770g/L），邻苯二甲酸二丁酯（0.3776g/L）。然后各取1mL储备液

用水和甲醇（20：80）稀释至10mL，作为待测溶液。

3、色谱测定

(1)按操作规程开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动Agilent1100

在线工作软件，设定操作条件。流量为1.000ml/min。

(2)待仪器稳定后，开始进样。将进样阀柄置于“LOAD”位置，用微量注射器吸

取混合物溶液50ul，注入仪器进样口，顺时针方向扳动进样阀至“INJECT”位置，

此时显示屏显示进样标志。

(3)记下各组分色谱峰的保留时间及峰面积及分离比。

(4)实验完毕，清洗系统及色谱柱。依次用甲醇-水（60：40）、甲醇-水（70：30）……

直到纯甲醇作流动相清洗，每次清洗至基线走稳，至少清洗15min。

五.实验结果

（1）流动相的比例为：高纯水：20%甲醇：80%，流速为1ml/min，记录色谱图，

并计算分离度

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