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Glycoengineered(糖基化工程)毕赤pastoris(毕赤酵母)中表达的重组单克隆抗体的纯

化工艺开发

摘要

一个强健的和可扩展的净化过程被开发快速从glycoengineered毕赤酵母发酵生成抗

体的纯度高、数量充足。蛋白A亲和层析用于捕获从发酵液抗体。PH梯度洗脱已应

用到要防止抗体沉淀在低pH的蛋白A列。从蛋白抗体色谱法所载一些产品的相关杂

质，被劈重链、重链和轻链的misassembling。它也有一些处理相关的杂质，包括蛋

白A残留、endotoxin(内毒素)、宿主细胞DNA和蛋白质。Ph值为4.5-6.0的最优氯

化钠渐变阳离子交换色谱法有效去除这些产品和过程相关的杂质。从glycoengineered

P.酵母抗体是其heterotetramer折叠、物理稳定性和约束力的亲和性的商业同行相媲

美。

介绍单克隆抗体（Mab）正迅速成为关键产品的生物医药产业。大多数商业治疗性抗

体是原封IgG分子与IgG1、IgG2正在共同的子类。这些IgGs由调解抗原和效应器

函数之间的联系，在免疫过程中发挥中心作用。对目标细胞的特异性抗原的igg抗体

可变域的绑定将抗体依赖的细胞毒作用(ADCC)及补体依赖性细胞毒性(CDC)定向杀

害的目标单元格。ADCC触发由交联体Fc域的IgG抗体（Fc(Rs)，尤其是Fc(RI和

Fc(制证机对免疫效应细胞。可能调解ADCC效应细胞包括自然杀手细胞、巨噬细胞

和嗜中性粒细胞。疾病预防控制中心是由补充组件C1q绑定到IgG，触发蛋白水解的

级联，以激活补充fc功能区启动。

IgG型抗体有两重链和两条轻链由分子内的二硫键形成heterotetramer在一起。重链

是通过共价键固定在天冬酰胺297(Asn-297)低聚糖的糖基化。人免疫球蛋白的主要

N-聚糖复杂biantennary(二分支的)类型，有核心heptasaccharide(七庚糖)，

GlcNac2Man3GlcNac2，被称为G0在我们的工作和文学。其他的糖分残留可能会附加

到核心要进一步生成复杂biantennary宇辉结构，如GalGlcNac2Man3GlcNac2(G1)，

Gal2GlcNac2Man3GlcNac2(G2)Neu5Ac2Gal2GlcNac2Man3GlcNac2。

目前，治疗单克隆抗体是在哺乳动物细胞，主要是在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株生产

的。在哺乳动物细胞中生产的重组抗体的宇辉配置文件是主要是异类。非均质性可以

变化广泛克隆克隆，是取决于生产和文化条件的模式。抗体宇辉配置文件可以有重大

的影响ADCC和疾病预防控制中心。DeglycosylatedIgG显示没有激活ADCC和疾病

预防控制中心的能力。Rituximab(利妥昔单抗)，嵌合的人权小鼠人性化抗CD20单克

隆抗体，生产的glycoengineered毕赤酵母中有两个较高亲和力向Fc（RIIIa和更大

B细胞耗竭效价比从CHO细胞生产的对应。N-聚糖从治疗单克隆抗体在哺乳动物细胞

中生产主要是fucosylated(岩藻糖基化)，在这一个fucose(岩藻糖)残留物附加到主的

N-乙酰氨基葡萄糖残留。它表明聚糖fucosylation影响ADCC和疾病预防控制中心的

功效。例如，关于人类IgG1afucosylated聚糖可以显著提高IgG1绑定到Fc(制证机

和增强ADCC功效，但并不影响绑定到Fc(RI或C1q。这些结果表明可能通过生成特

定的抗体glycoform优化抗体介导的效应的功能。

酵母是一个广泛使用的重组蛋白表达系统。但是，在野生型酵母生产的糖蛋白包含潜

在免疫原性高甘露糖类型限制为治疗蛋白和抗体生产的酵母表达系统使用的N-聚糖。

在酵母中的抗体表达的另一个挑战是重型和轻型链要形成he