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Biacore检测Fcɣn效应分子和IgG相

互作用的操作方法

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目录

一、实验目的：

二、实验试剂和耗材.

三、实验步骤.

（一）、仪器准备.

（二）、样品稀释.

（三）、样品检测过程.

（四）、实验结果分析.

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BiacoreT200检测Fcɣn效应分子与IgG结合操作指南

一、实验目的：

利用Biacore检测Fcɣn效应分子与IgG结合的动力学数据K、K及亲和力

ad

数据K。抗原Fcɣn分子量为43.5KD，商业化蛋白带有His标签；IgG分子量

D

为150KD。本实验利用NTA芯片捕获Fcɣn，IgG分子作为分析物检测Fcɣn与

IgG结合的动力学数据和亲和力数据。

二、实验使用机型、试剂和耗材

1、本实验所用的机型为：BiacoreT200。

、2S系列NTA芯片及试剂盒（试剂盒内含有0.5mMNicl2溶液和350mM

EDTA）。S系列NTA芯片货号：BR-1004-07（一片装），BR-1000-34（三片

装）；NTA试剂盒货号：28-9950-43。购买地均为GEHealthcare。

、缓冲液：310×pBS-P+pH7.4（货号：28-9950-84）；购买地为GE

Healthcare。

、去离子水（用40.22uM膜过滤过）。

、配体5Fcɣn：如果为商业化蛋白粉末，用水稀释到100ug/ml或200ug/ml，

分装在-20℃保存。推荐使用：Sinobio，无论使用哪家的Fcɣn，客户需要确

定Fcɣn的活性，在进行溶解时，确保溶解液中不含Tris。

、6IgG：母液IgG浓度至少在1.5mg/ml，样品体积在200ul以上纯度90%

以上（即跑SDS胶有两条带）。如果IgG中的盐离子浓度或多糖浓度

过高可进行脱盐，如果体积小于500ul选择GEHealthcare的PDMiniTrapTM

G-25，货号为如果体积小于1ml选择货号为的GE

Healthcare的PDMiniTrapTMG-25；如果体积在1.75-2.5mL选择GE

Healthcare的PD-10Deasalting，货号为

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、其他耗材：无盖61.5mlEP管（货号：BR-1002-87）、96孔板（货号：

BR-1005-03）、2型橡胶盖（货号：BR-1004-11）、96孔板封口膜（货号：

28-9758-16），购买地均为GEHealthcare。

三、实验步骤

（一）、仪器准备

1、开机操作

1)打开BiacoreT200系统和电脑的电源开关。BiacoreT200的电源开关位于系

统背面的左下角。开机后，需等待检测单元的温度达到预设温度（用户自设，

通常为25℃）。待温度稳定后，面板上的温度指示灯（黄色）会停止闪烁，

该过程可能需要30-60分钟。

2)打开BiacoreT200控制软件（Strart→Program→Biacore→BiacoreT200

ControlSoftware），运行后软件程序会自动和主机系统建立连接。

3)准备运行缓冲液。已经0.22μm膜过滤）：量取50ml10XHBS-EP+缓冲液、

450ml去离子水，混匀后放入500ml缓冲液瓶。

2、缓冲液的放置

1)将已经配制好的缓冲液放在T200系统左侧的缓冲液托架上，换上黑色的单

孔盖。

2)将缓冲液进液管A（注意软管上的蓝色标签）插入至缓冲液瓶底部。其余

三根进液管（B、C和D）放在左侧的舱