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叶绿素含量采用无水乙醇的方法测定
超氧化物歧化酶SOD活性采用邻苯三酚自氧化法测定
过氧化物酶POD活性采用愈创木酚法测定
过氧化氢酶采用过氧化氢法测定
丙二醛采用硫代巴比妥酸法测定
蛋白质含量采用考马斯亮蓝法每次测定重复3次，取平均值
测定方法
一．SOD，CAT及POD活性的测定
分别取0.4ｇ材料于预冷的研钵中，加入8ml预冷的50mmol-1磷酸缓冲液（pH7.8）（甲
液：取Na2HPO435.9g，加水溶解，并稀释至500mL乙液：取NaH2PO42.76g，加水溶解，
并稀释至100mL取上述甲液91.5mL和乙液8.5mL，混合摇匀即得。先加2ml,在冰浴下研
磨成匀浆后，将匀浆转入10ml离心管，再用6ml冲洗），10000rpm离心15min，取上清液
定容至10ml后于4℃保存。上清液用于可溶性蛋白质含量、SOD活性及POD活性的测定。
SOD活性测定
1.显色反应取5mL指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按
表47–1加入各溶液。混匀后，给1支对照管照上比试管稍长的双层黑色硬纸套遮光，与
其他各管同时置于4000lx日光灯下反应20-30min(要求各管照光情况一致，反应温度控制
在25～35℃之间，使酶活性高低适当调整反应时间)。
当样品数量较大时，可在临用前根据用量将表47–1中各试剂(酶液和核黄素除外)按比
例混合后一次加入2.65mL，然后依次加入核黄素和酶液，使终浓度不变。
表47-1各溶液显色反应用量
试剂酶）用量(mL)终浓度(比色时)
0.05mol/L磷酸缓冲液1.5
130mmol/LMet溶液0.313mmol/L
750μmol/LNBT溶液0.375μmol/L
100μmol/LEDTA-Na液0.310μmol/L
2
20μmol/L核黄素0.32.0μmol/L
酶液0.12支对照管以缓冲液代替酶
液
蒸馏水0.5
总体积3.3
3.SOD活性测定
至反应结束后，用黑布罩盖上试管，终止反应。以遮光的对照管作为空白，分别在560nm
下测定各管的OD值，计算SOD活性。
3.结果计算
已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD
活性。SOD总活性[u/g(FW)]=
式中：SOD总活性以酶单位每克鲜重表示。
比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。
ACK——照光对照管的吸光度。
AE——样品管的吸光度。
VT——样品液总体积，mL。
V1——测定时样品用量，mL。
W——样品鲜重，g。
蛋白质含量单位为mg/g。
愈创木酚法测定过氧化物酶（POD）活性
1.取两支试管，洗涤后甩干水分。
试剂管号（对照）测定管
0.05mol/LPH5.5的磷酸缓冲液2.9ml2.9ml
2%
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