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微生物实验注意事项汇总！

一、无菌操作要求

1.接种细菌时必需穿工作服、戴工作帽。

2.进行接种食品样品时，必需穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放

在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。

3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％

酒精棉球将手擦洁净。

4.进行接种所用的吸管，平皿及培育基等必需经消毒灭菌，打开

包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或

用95%酒精点燃烧灼三次后使用。

5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管

接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。

6.接种样品、转种细菌必需在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，

吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。

7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还

要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸

水中煮沸5min，再经火焰烧灼。

8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用

口吸。

二、无菌间使用要求

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1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随便打

开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7

平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。

2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭

工作台面，不得存放与试验无关的物品。

3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采纳室内悬吊紫

外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照耀时间不少于

30min，使用紫外灯，应留意不得直接在紫外线下操作，以免引起损

伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，

以削减紫外线穿透的影响。

4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随便出入，如

需要传递物品，可通过小窗传递。

5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。

三、消毒灭菌要求

微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培育基、被污染和接种的

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培育物等，必需经灭菌后方能使用。

（一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法

1、灭菌前预备

①全部需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿

用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。

②装培育基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管

芯抽出，用纱布包好。

2、装放

①干热灭菌器：装放物品不行过挤，且不能接触箱的四壁。

②大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒

内，物品之间不能过挤。

3、设备检查

（1）检查门的开关是否敏捷，橡皮圈有无损坏，是否平整。

（2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸

气或加热后，观看是手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应

按下列步骤进行：

①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重

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复使用时应将水量补足，水变混浊需更换）；

②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无

软管或软管锈蚀裂开的灭菌器不得使用）；

③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力

锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气（水沸腾后排气10-

15min）；

④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按

灭菌物品性质与有关状况而定）；

⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，马上打开排气阀排出蒸气，

待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，

不要打开排气阀，而应马上将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复

至零，温度降到60℃以下再开盖取物，以防突然减压液体猛烈沸腾

或容器爆破。

（3）卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：

①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷

空气经阻气器自动排出；

②夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅

室内冷空气经锅室阻气器自动排出；

③待锅室达到规定的压力与温度时，调整进气阀，使保持恒定至

灭菌完成；

④自然或人工降温至60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，