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国家流感中心标准操作规程

（修订版）

中国疾病预防控制中心

病毒病预防控制所

二○○七年三月

前言

为规范国家流感中心的实验技术和操作步骤，保证实验结果的准

确性和可重复性，并作为国家流感中心所有工作人员使用指南。依据

《中华人民共和国传染病防治法》、《中华人民共和国国家标准实验室

生物安全通用要求（GB1989-2004）》及相关法律法规，参考世界卫

生组织《实验室生物安全手册（第三版）》以及流感/禽流感相关推荐

方案，并根据《流行性感冒诊断标准》、《人禽流感诊断标准》和《禽

流感实验室检测技术方案》中的相关内容制定了本标准操作规程

（SOP）。在国家流感中心标准操作规程（2004年版）的基础上，增

补了大量内容，制定本标准操作规程。

本版标准操作规程包括基本生物学实验SOP、标本采集SOP、

病毒分离SOP、病毒鉴定SOP、病毒核酸检测SOP、血清学检测SOP、

动物学实验SOP、耐药性监测SOP以及标本及毒株管理SOP等。并

且根据近年来的工作需要和进展，建立了许多实验方法，如分子鉴别

诊断技术、禽流感H5N1NASBA检测方法、流感/禽流感抗体单放射

免疫扩散溶血技术（SRH）等以及研究工作中实验的操作规程。

本版与前版相比较有如下特点：第一、结构安排更趋合理，条目

清晰，以不同的实验目的为分类原则，便于查阅；第二、内容更为翔

实，易于理解和操作；第三、反复推敲、多方讨论，力争文字准确。

本版是由国家流感中心全体人员共同努力完成，是集体智慧的结

晶。但由于知识的局限以及撰写者不同角度理解的差异，本版标准操

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作规程在有些方面还存在不全面甚至错误的地方，今后将在实际工作

中及时进行修订和调整，以满足工作的需要。

本版标准操作规程自批准之日起开始实施。

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目录

第一部分标准操作规程1

第一章基本生物学实验SOP

MDCK细胞培养

细胞计数

细胞的保存和复苏

外周血单个核细胞分离

超速离心机的使用

第二章标本采集SOP

呼吸道标本采集

血清标本采集及储存

粪便标本采集及储存

组织标本采集

尸检标本采集

第三章病毒分离SOP

流感病毒的MDCK细胞分离方法

流感病毒的鸡胚分离方法

组织细胞半数感染量滴定

病毒EID测定

50

病毒空斑测定实验

蔗糖密度梯度离心纯化流感病毒

β-丙内酯病毒灭活

流感毒株的复苏

第四章病毒鉴定SOP

1%鸡红细胞悬液制备

1%豚鼠红细胞悬液制备

1%马红细胞悬液制备

受体破坏酶制备

血清处理

流感/禽流感病毒红细胞凝集试验

红细胞凝集抑制试验鉴定流感/禽流感病毒方法

流感病毒神经氨酸酶活性试验及其活性抑制试验

禽流感H5N1病毒感染间接免疫荧光检测技术

第五章核酸检测SOP

流感/禽流感病毒RT-PCR引物制备

流感/禽流感病毒Real-timePCR引物探针制备

禽流感病毒RT-PCR检测

人禽流感实时荧光定量PCR检测

禽流感病毒H5N1NASBA检测

分子鉴别诊断技