核医学习题集6章-体外放射分析技术.pdfVIP

第六章体外放射分析技术

【学习目标】

了解体外分析技术的发展和现状。掌握放射免疫分析的基本原理、基本方法

及质量控制。掌握免疫放射分析的基本原理及与放射免疫分析法的主要区别。了

解非放射免疫分析技术的几种类型，特别是时间分辨荧光免疫分析技术的基本原

理及特点。

【内容要点】

一、体外分析的发展和现状

核医学体外分析技术主要是利用放射分析方法或其派生的相关技术在体外

进行机体内物质种类和含量的检测。主要用来测定患者血清或体液中的激素、生

物活性物质和药物浓度等。它最早是在60年代由Yalow和Berson等偶然观察到

125I标记的胰岛素与胰岛素抗体的结合与体系中存在的非标记胰岛素的量呈一定

的相关性。从而建立了放射免疫分析法。放射免疫分析具有其它方法所不能比拟

的特点：①灵敏度高；②操作简便，成本低。

免疫放射分析属于放射性非竞争结合分析，是在放射免疫分析理论的基础

上，随着单克隆抗体技术的进步，不断发展而来。非放射性标记的免疫分析从上

世纪80年代以来得到快速发展。如荧光酶免疫分析、化学发光酶免疫分析以及

时间分辩荧光免疫分析等方法。

二、放射免疫分析

（一）基本原理

放射免疫分析的基本原理是利用放射性标记的抗原和非标记抗原同时与限

量的特异性抗体进行竞争性免疫结合反应。这种竞争结合反应可用下式表示：

***

Ag+AbAg-Ab+Ag

+

Ag

Ag-Ab+Ag

*Ag：标记抗原；Ag：非标记抗原；Ab：特异性抗体；

Ag-Ab：抗原-抗体复合物；*Ag-Ab：标记抗原-抗体复合物

*Ag-Ab的量（因变量）与Ag的量（自变量）之间存在的竞争性抑制数量关

系是放射免疫分析的定量基础，这种数量关系可以由标准竞争抑制曲线（简称标

准曲线）来表示。

（二）基本试剂

放射免疫分析的反应中主要包括三种试剂；抗体、标记抗原、非标记标准抗

原（标准品）。除此之外，现在许多试剂盒还提供分离试剂或材料，缓冲液及质

量控制用品等。

1、抗体放射免疫测定，需要选择亲和力大、特异性强、滴度高的使用。

2、标记抗原要求用于标记抗原的放射性核素比活度要高，放射化学纯度

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要好，还要有很好的免疫活性。主要有I、C和H。

3、标准品对标准品要求：①应与被测物属同一物质，其化学结构和免疫

活性相同；②放射化学纯度高，影响分析的杂质少；③定量精确。

4、分离方法分离的目的是放射免疫反应达到平衡后，使抗原抗体复合物

和游离抗原分离，两者分离后才能分别测量其放射性，理想的分离技术应具备既

安全又迅速，不受其它因素干扰，操作简便，重复性好等优点。分离方法主要有：

双抗体法、沉淀法、双抗体法+沉淀法、吸附分离法、固相分离法等。

5、放射性测量仪器如用125I做标记，常用γ井型计数器对γ射线进行测

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量。如用H或C做标记用液体闪烁计数器对β射线进行测量。

（三）质量控制（qualitycontrol,QC）

放射免疫分析的质量控制包括：实验室内部质量控制和实验室间质量控制。

1、实验室内部质量控制主要指标：零标准管结合率、非特异性结合率、

最低浓度管和最高浓度管的结合率之差应大于30%、标准曲线连线回归的参数、

ED、ED、ED和质控图。

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2、试剂盒质量控制主要指标：精密度、灵敏度、准确度、特异性、稳定

性、健全性。

3、实验室外质量控制

三、免疫放射分析

免疫放射分析是放射免疫分析的变种，是非竞争性的反应。可用下式表示：

*