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酵母蔗糖酶的分离提取

摘要：介绍了从酵母菌中提取蔗糖酶的过程和方法。利用有机溶剂自溶法、质量分数50%乙醇分级和透析的方法

纯化蔗糖酶，测得蔗糖酶的总活力和蛋白质含量均逐渐下降。

关键词：酵母、蔗糖酶、提取、纯化

Abstract:Thispaperintroducestheprocessandthemethodofinvertaseextractionfromyeast.Thenthepurifiedinvertase

wasobtainedbyaddingorganicdissolvant,precipitatationwith50%ethylalcoholanddialyzing。Theresultsshowedthe

wholevigourandthecontentofpoteinwasalldecreasedbydegrees.

Keywords:yeast;invertase;extraction;purification

蔗糖酶（invertase）（β-D-呋喃果糖苷水解酶）（fructofuranosidefructohydrolase）

（EC.3.2.1.26）,又称转化酶，特异地催化非还原糖中的β-D-呋喃果糖苷键水解，具有相对

专一性。不仅能催化蔗糖水解生成D-葡萄糖和D-果糖，也能催化棉子糖水解，生成密二糖

和果糖。由于果糖甜度高，约为蔗糖的1.36-1.60倍，在工业上具有较高的经济效益，蔗糖

酶的最适温度为45℃~50℃，最适ph为4.0~4.5.

1.材料与方法

1.1试剂

1)酵母粉（实验室提供）

2)醋酸钠(0.5g)

3)乙酸乙酯（8ml）

4)10%醋酸

5)无水乙醇

6)蒸馏水

7)3,5-二硝酸水杨酸试剂（DNS）

8)考马斯亮蓝G-520

9)5%蔗糖

10)NaOH溶液

11)系列标准蛋白液

12)9%生理盐水

13)蛋白质染色液

14)磷酸缓冲液buffer（0.005mol/LPH6.0）

注：整个实验应避免高温，以防止酶失活（水浴温35℃）

1.2器材

1)量筒25ml

2)烧杯100ml、500ml

3)大小试管若干

4)吸耳球、玻棒、胶头滴管、PH试纸、各种滴定管

5)恒温水浴锅、冰水浴锅

6)秒表

7)离心管、离心机

8)分光光度计

9)冰箱

10)透析袋

11)托盘天平

1.3操作方法

1.3.1蔗糖酶粗品制备方法

1）自溶法将5g酵母粉倒入500mL烧杯中、少量多次地加入15mL蒸馏水，搅拌均

匀，成糊状后加入0.5g乙酸钠、8mL乙酸乙酯，搅匀，盖好，于35℃恒温水浴中搅拌30min。

2）抽提补加蒸馏水10mL，搅匀，盖好，于35℃恒温过夜，4000r/min离心10min,

弃沉淀，得E1;量体积V1=17.5mL,取出2mL置于4℃冰箱保存，待测酶活力及蛋白质浓度(留

样1)。

3）乙醇分级和透析

测E1PH：用10%HAC调PH至４．５（注意少量、慢加、搅匀，防止调过），共加入0.5ml

10%HAc;

第一次乙醇分级（30%乙醇饱和度）：计算出使Ｅ１得乙醇浓度达30%时所需的无水乙醇Ｘ

１的体积为6.6ml，将Ｅ１和乙醇Ｘ１，放入冰浴中预冷，在不断搅拌下缓慢滴加乙醇，4000

ｒ／min离心10min，弃沉淀，留上清，得E2；量体积V2=19.5ml（留样２）;

第二次乙醇分级（50%乙醇饱和度）同上法加入Ｘ２（为达50%乙醇饱和度时需要补加的

无水乙醇的体积），计算的加入无水乙醇Ｘ２为7.0mL。4000ｒ／min离心10min，弃上清，

沉淀