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核酸检测步骤

一、引言

随着新冠疫情的全球爆发，核酸检测成为了疫情防控中必不可少的手

段之一。核酸检测是通过提取样本中的RNA或DNA，利用PCR技术

进行扩增，并通过荧光探针实现对病毒核酸的检测。本文将详细介绍

核酸检测的步骤。

二、样本采集

核酸检测需要采集患者体内的样本，目前常用的样本包括咽拭子、鼻

拭子、唾液、血液等。不同类型的样本采集方法略有不同，但都需要

遵循严格的操作规范。

1.咽拭子采集

咽拭子采集需要使用专用的喉拭子，在患者口腔中取样。具体操作步

骤如下：

（1）请患者张口，将舌头向下压住；

（2）用另一只手将喉镜插入患者口腔内；

（3）将喉拭子插入喉镜管道内，并顺着舌头向下滑动到悬雍垂处；

（4）在悬雍垂处旋转几次，使喉拭子充分接触到悬雍垂表面；

（5）将喉拭子取出，并放入样本管中。

2.鼻拭子采集

鼻拭子采集需要使用专用的鼻拭子，在患者鼻腔内取样。具体操作步

骤如下：

（1）请患者仰头，将鼻孔向上；

（2）用一只手握住鼻翼，使其张开；

（3）将鼻拭子插入另一个鼻孔中，并顺着鼻腔向上滑动到隆突处；

（4）在隆突处旋转几次，使鼻拭子充分接触到黏膜表面；

（5）将鼻拭子取出，并放入样本管中。

3.唾液采集

唾液采集需要让患者吐出口腔内的唾液。具体操作步骤如下：

（1）请患者不要进食、喝水和吸烟等活动30分钟；

（2）让患者张开口，将舌头放平；

（3）让患者闭上嘴巴，轻轻地咀嚼口腔内的唾液；

（4）将唾液吐入样本采集管中。

三、样本处理

采集到的样本需要经过处理才能用于核酸检测。一般情况下，样本处

理包括以下几个步骤：

1.样本裂解

样本裂解是将采集到的样本中的细胞或病毒释放出来，使其可以被

PCR扩增。常用的裂解方法有化学法、热裂解法和机械法等。

2.RNA/DNA提取

RNA/DNA提取是将样本中的RNA或DNA分离出来，以便后续PCR

扩增。常用的提取方法有酚-氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。

3.质量控制

质量控制是为了确保提取出来的RNA/DNA质量良好，可以被PCR扩

增。常用的质量控制方法有比色法、比浊度法和荧光定量等。

四、PCR扩增

PCR扩增是核酸检测中最核心的步骤之一。它通过不断循环加热、降

温和延伸，使目标序列在体系中大量复制，并通过荧光探针实现对病

毒核酸的检测。

PCR扩增一般分为三个步骤：变性、退火和延伸。其中，变性是将

DNA双链分离成两个单链；退火是将引物与模板DNA结合；延伸是

在引物的作用下，通过DNA聚合酶的催化作用使新的单链DNA合成。

五、结果判断

PCR扩增后，需要对PCR产物进行电泳或荧光信号检测，以确定是否

存在目标序列。如果存在目标序列，则说明样本中存在病毒核酸，可

以判断为阳性；如果不存在目标序列，则说明样本中不存在病毒核酸，

可以判断为阴性。

六、结论

综上所述，核酸检测需要经过样本采集、样本处理、PCR扩增和结果

判断等多个步骤。每个步骤都需要严格遵守操作规范和质量控制要求，

以确保检测结果的准确性和可靠性。