利用大肠杆菌生产胰岛素.pptVIP

利用大肠杆菌生产胰岛素胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。作用机理属于受体酪氨酸激酶机制。胰岛素作用机理（一）调节糖代谢胰岛素能促进全身组织对葡萄糖的摄取和利用，并抑制糖原分解和糖原异生，因此，胰岛素有降低血糖的作用。促进肌肉、脂肪组织等处的靶细胞细胞膜载体将血液中的葡萄糖转运入细胞。通过共价修饰增强磷酸二酯酶活性、降低cAMP水平、升高cGMP浓度，从而使糖原合成酶活性增加、磷酸化酶活性降低，加速糖原合成、抑制糖原分解。通过激活丙酮酸脱氢酶磷酸酶而使丙酮酸脱氢酶激活，加速丙酮酸氧化为乙酰辅酶A，加快糖的有氧氧化。通过抑制PEP羧激酶的合成以及减少糖异生的原料，抑制糖异生。抑制脂肪组织内的激素敏感性脂肪酶，减缓脂肪动员，使组织利用葡萄糖增加。胰岛素能促进脂肪的合成与贮存，使血中游离01脂肪酸减少，同时抑制脂肪的分解氧化。胰岛02素缺乏可造成脂肪代谢紊乱，脂肪贮存减少，03分解加强，血脂升高，久之可引起动脉硬化，04进而导致心脑血管的严重疾患；与此同时，由05于脂肪分解加强，生成大量酮体，出现酮症酸06中毒。07（二）调节脂肪代谢01胰岛素一方面促进细胞对氨基酸的摄取和蛋白02质的合成，一方面抑制蛋白质的分解，因而有03利于生长。腺垂体生长激素的促蛋白质合成作04用，必须有胰岛素的存在才能表现出来。因05此，对于生长来说，胰岛素也是不可缺少的激06素之一。（三）调节蛋白质代谢胰岛素可促进钾离子和镁离子穿过细胞膜进入细胞内；可促进脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。（四）其它功能0201030405提取质粒提取目的基因基因重组胰岛素的产生将质粒送回大肠杆菌生产步骤1.提取目的基因既从人的DNA中提取胰岛素基因,可使用限制性内切酶将目的基因从原DNA中分离。1.鸟枪法：用一大堆限制性核酸内切酶对附近基因进行剪切，再提取所需要的。至于如何筛选，用DNA分子杂交，即DNA探针2.人工合成法：根据转录蛋白或者mRNA推导出基因序列，然后人工合成，没有内含子3.从基因文库中提取：也就是事先已经提取完毕的拿来用4.PCR扩增技术：用于大量生产该段基因片段，用于商业化运作……从大肠杆菌的细胞质中提取质粒,质粒为环状。此质粒将作为胰岛素基因的载体。碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。煮沸法2.提取质粒取出目的基因与质粒,先利用同种限制性内切酶将质粒切开,再使用DNA连接酶将目的基因与质粒“缝合”,形成一个能表达出胰岛素的DNA质粒。3.基因重组