植物组织培养实验报告.pdf

摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物

激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无

菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第3组

即MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L)培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳

的愈伤组织诱导组合。

关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织

1.1实验材料：大豆子叶

1.2实验试剂与仪器

〔1〕试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂〔NAA、2，4-D、

KT、6-BA〕、无菌水、升汞、NaOH溶液

〔2〕仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、

不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁

置架、烧杯、电炉。

1.3实验方法

培养基的配制与灭菌

1.3.1.1配制培养基的准备阶段

〔1〕准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自

来水洗净，再用蒸馏水把每一个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80；

〔2〕在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g琼脂4份，7.5g蔗糖4份，在烧杯里

用千分之一天平上称取1.185gMS干粉4份〔烧杯不要清洗〕；

.z.

〔3〕剪小圆纸片40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片

10，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。

〔4〕把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。

1.3.1.2配制培养基

〔1〕在装有MS干粉的烧杯中按下表参加植物生长调节剂

实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL

激素的加样量(ml)

编号培养基配置

6-BANAAKT2,4-D

MS+6-BA

10.50.25

〔1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)

MS+6-BA

21.00.5

〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)

3MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-0.250.5

4D(1.0mg/L)0.51.0

MS+KT〔1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)

〔2〕用量筒量取250ml〔稍多〕蒸馏水，取一个不锈钢杯子参加150ml蒸馏水和

称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再参加混合好的MS培养基1号和蔗糖，

混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml；

〔3〕当温度降到60℃摆布时，将溶液pH调至5.8，普通加4滴NaOH溶液即可；

〔4〕取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml摆布培养基分装在培养

试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。

〔5〕用一样的方法配置2-4号培养基，并分装、捆扎。

.z.

高压湿热灭菌

〔1〕将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭

菌锅中用二次排气法在121℃灭菌20min。

〔2〕高压灭菌锅操作

先关闭高压灭菌锅放气阀,待锅压强升到0.05MPa时,翻开放气阀排出空气,当

压力表指针为0MPa时关闭放气阀。继续加热,当压力表再次升到0.05MPa时,再一

次排除灭菌锅的空气,使压力表指针再次降为0MPa，关闭放气阀。继续加热,让

锅的压力上升到一个大气压〔0.103MPa〕，此时锅温度为121.6℃时，控制热源，

维