生物技术生物工程植物细胞工程.ppt

1基因水平的检测，限制性内切酶分析、DNA序列分析、聚合酶链式反应(PCR)、Southernblot分析、Northernblot分析、原位杂交六转入基因表达分析第96页,共103页，星期六，2024年，5月酶联免疫吸附法(ELISA)Western杂交β-D-葡糖醛酸糖苷酶的组织化学定位分析、β-D-葡糖醛酸糖苷酶的荧光分析、β-D-葡糖醛酸糖苷酶的化学发光分析荧光素酶分析。定量实时PCR(quantitativereal-timePCR)术通过荧光报告物对PCR反应对基因组中的某个单拷贝基因进行实时检测转基因的拷贝数。PCR产物量与起始模板量成正比。2表达分析的方法第97页,共103页，星期六，2024年，5月Outline植物细胞工程基本概念：定义内容植物细胞培养特性。第98页,共103页，星期六，2024年，5月植物细胞一般培养技术植物细胞营养需求培养方式培养条件植物细胞种质保藏。第99页,共103页，星期六，2024年，5月植物细胞原生质体培养技术原生质体制备培养方法及其再生原生质体培养意义。第100页,共103页，星期六，2024年，5月植物原生质体融合技术促融因素融合过程杂种细胞筛选技术。第101页,共103页，星期六，2024年，5月植物细胞大规模培养技术培养方式培养条件影响培养的因素。第102页,共103页，星期六，2024年，5月*感谢大家观看第103页,共103页，星期六，2024年，5月1.提高变异频率2.细胞工程技术进行遗传重组的材料，细胞融合和基因转移必需在原生质体上进行。三原生质体培养意义第64页,共103页，星期六，2024年，5月体细胞杂交一）类型两大类：?对称融合（asymmetricfusion）－两个完整的细胞原生质体融合。?非对称融合（symmetricfusion）－利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合。核失活－X射线，碘乙酰胺（IOA）、碘乙酸质失活－罗丹明（R－6－G，抑制线粒体氧化磷酸化。四、原生质体融合技术第65页,共103页，星期六，2024年，5月1．材料准备2．原生质体的制备3．融合方法PEG，电融合4．杂种细胞选择系统与杂种植株鉴定5.细胞壁再生愈伤组织形成和植株再生二）融合过程第66页,共103页，星期六，2024年，5月3．融合方法PEG，电融合二）融合过程按比例混合双亲原生质体→滴加PEG摇匀静置→滴加高钙高pH液，摇匀静置→滴加原生质体培养液洗涤数次→离心得原生质体细胞团→筛选再生杂合细胞。第67页,共103页，星期六，2024年，5月1）杂种细胞的选择系统外观选择互补选择荧光标记选择4.杂种细胞选择系统与杂种植株鉴定第68页,共103页，星期六，2024年，5月2）体细胞杂种的鉴定?形态鉴定：根据双亲的形态学性状观察进行鉴定。?细胞学鉴定：细胞器鉴定、染色体鉴定。?生化鉴定：同功酶鉴定。?分子鉴定：RFLP鉴定、RAPD标记鉴定。4杂种细胞选择系统与杂种植株的鉴定第69页,共103页，星期六，2024年，5月RFLP基因型之间限制性片段长度的差异RAPD建立在PCR基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术4杂种细胞选择系统与杂种植株的鉴定第70页,共103页，星期六，2024年，5月第71页,共103页，星期六，2024年，5月原生质体培养1~3天，细胞壁再生再生细胞一旦分裂，继续生长1形成细胞团，发育成愈伤组织，诱导分化出芽及根再生为完整植株；2形成胚状体，再产生植株；5、细胞壁再生愈伤组织形成和植株再生第72页,共103页，星期六，2024年，5月1、植物育种中的核质替换2、细胞质杂种的获得3、远缘杂交创造新物种4、细胞器的互作研究三）、融合技术应用第73页,共103页，星期六，2024年，5月第四节植物细胞大规模培养技术第74页,共103页，星期六，2024年，5月植物细胞规模培养技术要点（1）细胞系的建立和选择有效成分分析悬浮细胞系单细胞培养与筛选细胞增殖第75页,共103页，星期六，2024年，5月（2）优良细胞系的增殖培养?所选择的优良细胞系，进行大规模繁殖，得到足够的细胞是建立细胞规模化培养体系的中间环节。第76页,共103页，星期六，20