分子生物学第五章原核转录.ppt

中心法则;转录相关的一些概念;编码链（codingstrand）：与mRNA序列相同的DNA链称为编码链，又叫有义链（sensestrand）。

模板链（templatestrand）：根据碱基互补的原则指导RNA合成的DNA链称为模板链，又叫反义链（antisensestrand）。;转录的基本特点;;AtranscriptionunitisasequenceofDNAtranscribedintoasingleRNA,startingatthepromoterandendingattheterminator.;;转录与复制的比较;RNA聚合酶;;2.2原核生物中的RNA聚合酶

原核生物中由一种RNA聚合酶催化所有RNA(mRNA,rRNA和tRNA)的合成。

核心酶：2?，β；β’；ω亚基

RNA聚合酶全酶

σ亚基：启动子的识别

RNA聚合酶是目前已知的最大的酶之一。;;大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析;核心酶与DNA序列结合是随机的，平均结合常数是2×1011；

全酶因为包含σ亚基与特异序列（启动子）的结合能力提高，降低与随机序列结合的能力。;RNA聚合酶;转录起始位点：新生RNA链第一个核苷酸对应的DNA上碱基，+1

转录的起始与转录的频率：转录起始后RNA聚合酶通过启动子的时间代表该启动子的强弱，启动子强，通过的时间短，转录频率高；

细菌RNApolymerase

与转录相同的方向为下游，标记为+1，+2，+3……，与转录相反的方向为上游，标记为-1，-2，-3…；

提纯被保护的片段后却发现，RNA聚合酶并不能重新结合或并不能选择正确的起始点，表明在保护区外可能还存在与RNA聚合酶对启动子的识别有关的序列。

根据终止作用是否需要ρ因子（释放因子，是实现终止作用的蛋白质辅助因子），可以分为：

转录单元：可被RNA聚合酶转录成完整的RNA的一段DNA序列包括启动子和终止子；

细菌RNApolymerase

依赖于ρ因子的终止子（弱终止子）

依赖于ρ因子的终止子（弱终止子）

模板链（templatestrand）：根据碱基互补的原则指导RNA合成的DNA链称为模板链，又叫反义链（antisensestrand）。

1975年，Pribnow和Schaller将RNA聚合酶全酶与模板DNA结合后，用DNaseI降解DNA，得到41～44个核苷酸对的DNA片段。

在原核中90%为嘌呤，A或G；

“Crabclaw”shapeofRNAP

(TheshapeofDNApolis__)

结合DNA使之解链，并具有解旋和重新螺旋化DNA的作用

与转录因子相互作用调??转录速度

其后果是合成一条鱼DNA链序列完全相同（除T/U）的RNA单链。

结论：-10区有助于dsDNA解开，-35区有助于启动子与DNA聚合酶全酶的结合（sigma因子介导）。

Activecentercleft

序列分析发现，在被保护区内有一个由5个核苷酸组成的保守序列，是聚合酶结合位点，称为Pribnow区，其中央大约位于起点上游10bp处，所以又称为–10区。;RNApolymerases的亚基;细菌RNApolymerase;a;“Crabclaw”shapeofRNAP

(TheshapeofDNApolis__);启动子的结构和功能;-10区的发现;其保守序列为TATAAT，位于-10bp左右，其中3′端的“T”十分保守。

A.T较丰富，易于解链。

它和转录起始位点I一般相距5bp。

;-35区的发现;-10区和-35区在转录起始中的作用;－10区和－35区的最佳距离;;转录过程-起始（Initiation）;;;RNA聚合酶含盖在起始点的上游70bp处，这种结构由DNA、RNA聚合酶构成，叫做二元闭合复合体。

当DNA双链变成单链时，称为二元开放复合体，这个阶段是不可逆的。解旋区域：－9---＋13。转录泡。

聚合酶全酶的σ因子从复合物上释放，合成9nt的RNA，由RNA聚合酶-DNA-新生RNA形成的复合物为三元复合物。

此时RNA聚合酶一直处于启动子区，转录进入延伸阶段。;Transcriptionbubble;三元复合物的去向;转录过程-延伸（Elongation）;原核生物的RNA聚合酶（核心酶）按照5’－3’方向延伸RNA链，解旋区域也随之移动，即边解旋，边合成，边重新螺旋。;转录过程-终止（Termination）;不依赖?因子的终止子;该类终止子也有回文区，但是不富含GC，回文结构后无寡聚