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淀粉酶活力测定

淀粉酶活力的测定

一、目的

学习和掌握测定淀粉酶（包括α-淀粉酶和β-淀粉酶）活力的原理和方法。

二、原理

淀粉是植物最主要的贮藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基

本原料。淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。

淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中

的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀

粉的粘度降低，因此又称为液化酶。β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水

解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。淀粉酶催化产生的这些还原

糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，其反应

如下：

淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制

作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位

重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。

淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最

强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。两种淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐

酸，在pH3.6以下迅速钝化。β-淀粉酶不耐热，在70℃15min钝化。根据它们

的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。本

实验采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶的活力。在非钝化条件下

测定淀粉酶总活力（α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力），再减去α-淀粉酶的活

力，就可求出β-淀粉酶的活力。

三、实验材料、主要仪器和试剂

1．实验材料

萌发的小麦种子（芽长约1cm）

2．仪器

酶活力测定取样表

操作项目α-淀粉酶活力测

定β-淀粉酶活力测定

Ⅰ-1Ⅰ-2Ⅰ

-3Ⅱ-4Ⅱ-5Ⅱ-6

淀粉酶原液（mL）1.01.0

1.0000

钝化β-淀粉酶置70℃水浴15min，

冷却

淀粉酶稀释液（mL）000

1.01.01.0

3,5-二硝基水杨酸（mL）2.000

2.00.0

预保温将各试管和淀粉溶

液置于40℃恒温水浴中保温10min

1%淀粉溶液（mL）1.01.01.0

1.01.01.0

保温在40℃恒温水浴中

准确保温5min

3,5-二硝基水杨酸（mL）02.0

2.002.02.0

将各试管摇匀，显色后进行比色测定光密度，记录测定结果，操作同标准曲线。

五、结果计算

计算Ⅰ-2、Ⅰ-3光密度平均值与Ⅰ-1光密度之差，在标准曲线上查出

相应的麦芽糖含量（mg），按下列公式计算α-淀粉酶的活力。

计算Ⅱ-2、Ⅱ-3光密度平均值与Ⅱ-1光密度之差，在标准曲线上查出相应

的麦芽糖含量（mg），按下式计算（α＋β）淀粉酶总活力。