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免疫学检验与临床刘斌

2免疫学检测是指：借助免疫学、细胞生物学、分子生物学等理论或方法，对免疫分子（抗原、抗体、补体、细胞因子等）和免疫细胞进行定性、定量检测。概述临床上、免疫学检测可用于疾病的诊断、病情监测和疗效评价等。

3抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。抗原抗体反应一：慨念二：抗原抗体反应的特点1.特异性2.可逆性3.阶段性4.比例性

4（一）、特异性（specificity）特异性示意图概念：一种抗原分子通常只能与其刺激机体后产生的抗体结合，这种抗原与抗体结合反应的专一性称为特异性。

5决定因素：由抗原决定簇和抗体分子超变区之间空间结构的互补性决定的应用：由于抗原抗体反应具有高度特异性，故可用已知的抗原（抗体）来检测相应未知的抗体（或抗原）。

6概念：两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应。抗原抗体交叉反应示意图B交叉反应

7（二）、比例性（proportionality）1、比例性是指抗原与抗体发生可见反应遵循一定的量比关系。2、以絮状沉淀实验为例，受抗原抗体比例性的影响非常明显。3、根据所形成的沉淀物及抗原抗体比例关系绘制反应曲线。

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9抗原-抗体反应的基本检测方法1.凝集反应2.沉淀反应3.免疫标记技术

10我科现在用凝集反应检验的项目主要有FDP和RPR。主要特点是灵敏度比较低，需要人肉眼观察结果，对检验人员熟练程度有一定要求。

11沉淀反应当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对浊度进行测定从而检测抗原含量。检测项目：IgG、A、M，C3、C4、ASO、RF、PA、CRP、尿csf、NAG等。

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13优点:灵敏度高（高于单扩法5-10倍），稳定性好（CV﹤10%），操作简便，结果准确不足:①抗体用量较大；②溶液中的抗原-抗体复合物分子应足够大，分子太小阻挡不了光线的通过；数量要足够多，否则溶液浊度变化太小，对光通量影响不大；对光度计的灵敏度要求高，这样微小的浊度变化能引起透光率改变，因此通常要加增敏剂。灵敏度较散射比浊法低。③增敏剂自凝出现非特异性凝集。透射比浊法方法评价(我们科室现在都是这种方法）

14粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素密切相关，其公式如下：Iθ＝I0［4π2（dn/dc)2Mc(1+cosθ)］Nγ2λ4免疫散射比浊法(我们科马上要引进的特种蛋白仪所用技术）

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16免疫标记技术1.酶免疫技术2.化学发光免疫技术3.免疫荧光技术4.免疫印迹技术5.放射免疫技术

17(1)酶免疫测定

(enzymeimmunoassay,EIA)酶免疫测定（EnzymeImmunoAssay,EIA）是指用酶（如HRP,AP）标记抗原或抗体然后进行反应，将抗原－抗体反应的特异性和酶促反应的高效性相结合。

18我们科常用酶免技术检测的项目有：甲，乙，丙，丁，戊肝和HIV。

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20HAV感染标志物出现时间

21HAV感染检测标志物HAV-IgM：一周内阳性占45%1～2周内出现阳性35%2～4周内出现阳性10%可用于甲型肝炎的明确诊断HAV-IgA分泌型抗体HAV-IgG出现较晚，几乎终身存在，阳性说明曾有过感染，保护性抗体HAV-Ag急性感染发病前1～15天，粪中阳性率为70%～85%，发病一周可降为一半左右，发病半个月后很难检测到是特异性诊断指标HAV-RNA病毒存在的指标

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23乙肝“三对”乙肝表面抗原(HBsAg)：最早出现在血液中的病毒抗原乙肝表面抗体（抗HBs）：中和或保护抗体乙肝e抗原（HBeAg）：第二个出现在血液中的病毒抗原乙肝e抗体（抗HBe）乙肝核心抗体（抗HBc）：最早出现在血液中的抗体（IgM）乙肝核心抗体（抗HBc）：IgG

24HBsAgHBsAg是S基因编码的一个蛋白，容易发生变异。HBsAg有一个特异的共同抗原决定簇“a”和至少两个亚型决定簇“dy”和“wr”血清型为adw、adr和ayw我国绝大多数地区以adr为