液相色谱定量方法指导原则.ppt

标准加入法（二）b.可以加入一系列浓度，按标准曲线外推法计算出欲测物在样品中的含量。优点：不需要另外的内标物，不必要进样非常准确；操作简单；若在前处理过程加入，可补偿被测组分在处理过程中的损失。缺点：色谱条件要求完全一致，否则会带来分析误差。7常用的几种定量测定方法（十四）第31页,共40页，星期六，2024年，5月

7常用的几种定量测定方法（十五）

标准加入法（三）标准加入法标准曲线绘制①将一系列已知量待测物分别加入到几等份的样品中，配制成浓度为(cx+0),(cx+c1),(cx+c2),(cx+c3)……..和样品有相同基体的标准系列溶液(加标，spiking)；②通过仪器分别测量以上系列溶液的响应值S0，S1，S2，S3，S4……；③以响应信号S对浓度c作图，再将直线外推与浓度轴相交于一点(下图)，求得样品中待测物浓度cx。第32页,共40页，星期六，2024年，5月cx0.00.20.0102030-10浓度，cSS2S3S4S10.40.60.81.01.2?当样品量很少时，可在一份样品中加标，加一次作一次测量，可得到上述方法相同的结果；?当觉得上述过程麻烦时，可只加标一次，分别测量样品和加标样品的仪器响应，再直接通过公式进行计算。优点：基体(matrix)相近，或者说基体干扰相同；缺点：麻烦，适于小数量的样品分析。第33页,共40页，星期六，2024年，5月8影响定量准确度的因素1、样品制备--衍生化成可气化的或有紫外吸收或带荧光的，转化率要高--溶剂--样品回收率--样品溶液的贮存2、进样技术--人员手动进样--进样装置的准确性3、色谱条件变化—柱温（气相）、流动相组成（液相）；柱效对峰高有影响，峰面积无影响（保证分离度的情况下）4、检测器特性：线性范围和稳定性、特殊组分使用选择性检测器第34页,共40页，星期六，2024年，5月问题几种重叠峰的切割（一）第35页,共40页，星期六，2024年，5月问题重叠峰切割和计算（二）第36页,共40页，星期六，2024年，5月问题重叠峰切割和计算（三）第37页,共40页，星期六，2024年，5月问题重叠峰切割和计算（四）第38页,共40页，星期六，2024年，5月问题重叠峰切割和计算（五）两峰等高误差最小，差距大，小峰误差大第39页,共40页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第40页,共40页，星期六，2024年，5月**在此**在此关于液相色谱定量方法指导原则1有关色谱峰的基本概念（一）峰底(CD):峰的起点与终点之间连接的直线峰高(h):峰最大值到峰底的距离峰宽(KL):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离半高峰宽(W1/2):通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离峰面积（A）:峰与峰底之间的面积,又称响应值拖尾峰（Tailingpeak）:后沿较前沿平缓的不对称峰前伸峰（Leadingpeak）:前沿较后沿平缓的不对称峰基线（Baseline):在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线基线噪声（N）:由各种因素所引起的基线波动基线漂移(Baselinedrift):基线随时间定向的缓慢变化第2页,共40页，星期六，2024年，5月1有关色谱峰的基本概念（二）第3页,共40页，星期六，2024年，5月2通过测量和计算得到的色谱参数（一）?死时间(deadtime，t0)—不保留组分的保留时间，即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。?死体积(deadvolume，V0)—由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。V0＝F×t0（F为流速）?保留时间(retentiontime，tR)—从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。?保留体积(retentionvolume，VR)—从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积，又称洗脱体积。VR＝F×tR。?调整保留时间(adjustedretentiontime，tR)—扣除死时间后的保留时间。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR只决定于组分的性质，因此tR（或tR）可用于定性。tR＝tR－t0?调整保留体积(adjustedretentionvolume，VR)