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（生物科技行业）医学微生物学与免疫学

医学微生物学和免疫学

实验指导

（供医疗、护理、口腔、药学等专业用）主编：彭效祥

班级： 学号： 姓名：

山东万杰医专微免教研室编制2007年6月12日

目录

实验项目壹细菌形态及结构观察 3

实验项目二细菌形态学检查法 4

实验项目三细菌的分布 6

实验项目四细菌的消毒及药敏试验 7

实验项目五血型抗原检测 9

实验项目六免疫球蛋白的测定 10

实验项目七细菌凝集反应 12

实验项目八琼脂双扩散试验 13

实验壹细菌形态及结构观察

壹、实验目的

1、熟悉显微镜油镜的使用方法，学生能独立用油镜观察细菌标本。

2、认识细菌的基本形态及特殊结构----鞭毛、荚膜、芽胞等。

二、实验内容

1、显微镜油镜的使用方法及维护

2、细菌形态及结构观察

三、实验仪器、设备及材料

1、显微镜

2、标本（鞭毛、荚膜、芽胞、葡萄球菌、链球菌等）

四、实验原理

细菌较小，肉眼不能直接观察，通过显微镜放大1000倍后观察细菌的形态结构

五、实验步骤

1、显微镜油镜使用由指导教师讲解、演示、学生自己操作

2、细菌的基本形态观察—个人操作

个人使用油镜观察细菌中的球菌、杆菌、弧菌等形态标本片。3、细菌的特殊结构观察—示教

认真观察示教标本——芽孢、荚膜及鞭毛形态。

六、实验报告要求绘出观察到的细菌形态及结构图。

七、实验注意事项

1、显微镜的正确使用

2、避免压碎标本片和损坏镜头

八、思考练习

1、如何正确使用显微镜的油镜观察细菌2、绘制出细菌常见的形态和结构

实验二细菌形态学检查法

壹、实验目的

1、熟悉细菌涂片的制作。2、掌握革兰氏染色法。

二、实验内容

1、细菌涂片制作

2、革兰氏染色法

三、实验仪器、设备及材料

1、菌种（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）、取菌环、玻璃片、生理盐水、酒精灯

2、搪瓷盆、支架、冲洗瓶、染液（结晶紫或龙胆紫、碘液、95%酒精、稀释复红）

四、实验原理

1、G+菌细胞壁结构较致密,含脂类少,乙醇不易透入,95%乙醇可使细胞壁脱水,细胞间隙缩小,通透性下降,阻碍结晶紫和碘的复合物渗出;而G-菌的细胞壁结构较疏松,含脂类量多.易被乙醇溶解,致使细胞壁通透性增高,细胞内的结晶紫和碘的复合物易被溶出而脱色.

2、G+菌含大量核糖核酸镁盐，可和碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不易被脱色，G-菌含核糖核酸镁盐少，易被脱色。

3、G+菌等电点（PH2-3）比G-菌等电点（PH4-5）低，在同壹PH染色环境中，G+菌比G-菌带的负电荷多，和带正电荷的碱性染料（结晶紫）结合牢固，不易脱色。

五、实验步骤

1、细菌涂片制作—个人操作

（1）、取洁净载玻片壹张，于中心滴加生理盐水壹小滴

（2）、用铂金耳以无菌手续取菌少许，涂于生理盐水中，使成1cm2左右微混浊

菌液，待干。

（3）、将涂片通过火焰三次，固定菌膜即成。

2、染色

（1）、初染加结晶紫染液于涂片上,染壹分钟后,用水洗去染液.

（2）、媒染加碘液染壹分钟,水洗.

（3）、脱色加95%乙醇,不时摇动30秒,至无紫色脱落为止,水洗.

（4）、复染加稀释石炭酸复红液壹分钟,水洗,干后镜检.

六、实验报告要求记录涂片及染色过程及观察结果。

七、实验注意事项

（1）、染色结果常受操作者技术影响,尤其是容易过度脱色,往往阳性染成阴性.

（2）、在同壹载玻片上,需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌作革兰阳性及阴性对照.

（3）、染色关键在于涂片和脱色,涂片不宜过厚,固定不宜过热,脱色不宜过度.

（4）、菌龄为18～24小时为佳.

八、思考练习

1、涂片的制作方法及革兰氏染色法的步骤2、革兰氏染色法的意义

实验三细菌的分布壹、实验目的

1、了解细菌在自然界及正常人体皮肤上的分布情况，树立无菌观念。2、熟悉细菌的培养方法

二、实验内容

1、细菌在自然界的分布