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α-淀粉酶的提取、分离及测定
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（生化试验小组-2005.4）
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试验全程安排：
0
样品的粗处理及粗分离，包括：
1）样品处理
2）离子交换色谱分离
第一天
3）紫外检测（紫外测定蛋白），绘出色谱图
4）收集样品
对各峰收集样品进行分析，包括：
1）精确测定蛋白含量（Folin-酚）
第二天2）测定酶活
3）比活计算
对活性峰及原液进行分析及鉴定，包括：
1）SDS－PAGE分析（分子量分析）
第三天
2）纯化倍数计算等
试验一、色谱分离淀粉酶
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1.1试剂及设备
离子交换树脂0
-20℃冰箱00
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样品管（5-10ml试管）
1.5ml离心管0
紫外分光光度计0
α-淀粉酶样品00
秒表00
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胶头吸管（进样用）
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平衡缓冲液（pH8.0，0.01M磷酸盐缓冲液）
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洗脱缓冲液（平衡缓冲液+0.1M，0.3M，0.5M，1.0M的氯化钠）
试剂瓶0
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1.2离子交换色谱原理与方法
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色谱(chromatography)是一种分离的技术,随着现代化学技术的发展应运而生。20世纪
初在俄国的波兰植物化学家茨维特(Twseet)首先将植物提取物放入装有碳酸钙的玻璃管中，
植物提取液由于在碳酸钙中的流速不同分布不同因此在玻璃管中呈现出不同的颜色，这样就
可以对各种不同的植物提取液进行有效的成分分离
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