病毒性疾病标本采集、保存与检测.pptVIP

2006年11月，安徽省广德县报告10例聚集性发热伴血小板减少的病例，首发病例死亡，诊断为“疑似流行性出血热”在其诊疗和护理的医务人员和家属接触者中出现9例病例，其中医务人员4例，家属5例。续发病例具有首发患者呕出血液和其他分泌物暴露史经检测确诊为嗜吞噬细胞无形体病。这是我国首次确认人粒细胞无形体病此后山东、安徽、河南等省也相继有疑似无形体病报告ZhangLijuan,etal.JAMA2008,300(19):2263-2270背景2007年3-9月，河南省信阳市及其周边地区共报告79例疑似无形体病病例，死亡10例。针对该起疫情的病原学检测未能做出明确结论2009年3-10月，湖北随州、黄冈等6个市共报告疑似无形体病病例93例，6例死亡（其中随州58例、黄冈18例）。经实验室检测，嗜吞噬细胞无形体均为阴性，1例病例查菲埃里克体阳性背景疾病特点多为急性起病，多数患者伴有乏力、纳差、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，部分患者出现黑便、牙龈出血、皮肤瘀点或瘀斑、眼结膜充血等出血症状。绝大多数患者白血病不高或降低、血小板减少，部分患者谷丙/谷草转氨酶升高、尿蛋白阳性。病例均发生在丘陵地区，发病时间集中在5-10月。男性多于女性，且多为农民。20岁以下及80岁以上人群未见发病。0102背景01病毒02细菌03立克次体04埃里克体05无形体发热伴血小板减少综合征监测血凝块血清白细胞血浆采集标本标本保存血清可在4℃存放3d、-20℃以下长期保存。用于病毒等病原分离和核酸检测的标本应尽快进行检测24h内能检测的标本可置于4℃保存，24h内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存壹贰标本运送要严格做到生物安全依据病因分析的病原体分类，如果为高致病性病原微生物，应严格按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）和《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（中华人民共和国卫生部第45号令）、《人间传染的病原微生物名录》等有关规定执行标本的预处理血清灭活病毒性疾病的实验室检测方法可分为三类，即直接检测、间接检测和血清学检测直接检测直接检测临床标本中病毒颗粒、病毒抗原或病毒核酸方法电镜/免疫电镜检测、组织中包涵体检查、IFA/ELISA检测抗原、病毒核酸/基因组检测等特点一般在标本采集、送达的当天或次日就可得到结果，这对于需要根据实验室检测结果进行临床处置和尽早采取防控措施极为重要，但对标本的要求也较高，病变部位标本的阳性结果比其它部位的阳性结果诊断意义大得多抗原检测常用方法免疫荧光试验（IF）、双抗体夹心ELISA法等IF优点：快速、易于操作缺点：敏感性和特异性较低IF试验对标本质量的要求较高由于在结果判定时有一定主观性，需要检测人员具有较丰富的经验双抗体夹心ELISA法比IF复杂，但敏感性和特异性较高核酸检测已经成为病毒性疾病实验室诊断中最常用的方法，发挥着越来越重要的作用，核酸检测的方法多种多样，主要包括两类不进行病毒核酸扩增的探针杂交法核酸扩增的方法：PCR/RT-PCR/Real-timePCR）、基于核酸序列的扩增（如NASBA）InstituteforViralDiseaseControlandPrevention(IVDC),ChinaCDCInstituteforViralDiseaseControlandPrevention(IVDC),ChinaCDCInstituteforViralDiseaseControlandPrevention(IVDC),ChinaCDC*********

病毒性疾病标本采集、保存与检测

中国疾控中心病毒病所

王世文

采样前准备包括各种采样现场需要的器械、耗材，无菌标本容器，采样后处理试剂，低温保存设备和个人防护装备，以及各种采样表格等明确采样要求针对不同事件的处置，采样目的、对象、标本种类各不相同，采样人员需要根据事件或疫情的特点，制定出详细的、有针对性的采样工作程序。内容主要包括：采样目的、对象、时间、部位、标本量、无菌要求（一般不需要）、标本保存与运输条件等，并需根据现场实际情况进行必要的调整现场采样标本采集应严格按照相关生物安全规定进行保护医务和疾控人员血标本-血清需采集多份血清标本至少急性期（发病7d内或发现时）恢复期（与急性期间隔2-3周）分别采集外周静脉血各5ml～6ml，分离后的血清分装于3个塑料螺口血清管中一份0.5ml左右，用于即将开始的检测一份检测备份一份留存监