UBE3B抑制HIF-2α的降解促进乳腺癌的生长与转移.pdfVIP

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UBE3B抑制HIF-2α的降解促进乳腺癌的生长与转移.pdf

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山东师范大学硕士学位论文

摘要I

ABSTRACTIII

第一章综述1

1.1乳腺癌简介1

1.2泛素-蛋白酶降解途径1

1.3UBE3B2

1.3.1UBE3B简述2

1.3.2UBE3B结构与功能3

1.3.3UBE3BKaufman3

与综合征

1.3.4UBE3B与癌症4

1.4HIF-2Α6

1.4.1HIF概述6

1.4.2HIF-2α与HIF-1α7

1.4.3HIF-α与癌症9

1.4.4HIF-2α与乳腺癌10

1.5前期基础与研究目的11

第二章材料与方法12

2.1实验材料12

2.1.1实验细胞12

2.1.2实验菌株12

2.1.3实验试剂12

2.1.4质粒15

2.1.5试剂配制17

2.1.6主要仪器及设备20

山东师范大学硕士学位论文

2.2实验方法21

2.2.1细胞实验21

2.2.2小鼠实验25

2.2.3基因表达载体的构建27

2.2.4敲低载体的构建33

2.2.5蛋白免疫共沉淀34

2.2.6蛋白免疫印迹实验35

2.2.7蛋白质丽春红染色实验38

2.2.8泛素化实验38

2.2.9荧光定量PCR39

2.2.10荧光素酶报告基因实验（LuciferaseReporterAssay）42

第三章实验结果43

3.1在乳腺癌细胞系中UBE3B促进HIF-2Α的稳定性43

3.1.1在乳腺癌细胞中过表达UBE3B使HIF-2α蛋白水平上调43

3.1.2UBE3BHIF-2α43

在乳腺癌细胞中敲低使蛋白水平下调

3.1.3UBE3B延长HIF-2α半衰期44

3.1.4低氧状态下UBE3B延长HIF-2α半衰期45

3.1.5UBE3B通过抑制VHL介导的HIF-2α降解来促进其稳定性46

3.1.6UBE3B通过其E3酶活性抑制VHL与HIF-2α的相互作用47

3.2UBE3B促进HIF-2Α的泛素化47

3.2.1UBE3B抑制HIF-2α泛素蛋白酶体降解途径的降解-48

3.2.2UBE3B促进HIF-2α的K63型多聚泛素化48

3.2.3UBE3B在体外促进HIF-2α的泛素化49

3.2.4UBE3BHIF-2α50

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