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液体菌种生产技术规程第8部分：猴头菇

1范围

本标准规定了猴头菇（Hericiumerinaceus）液体菌种生产的术语和定义、生产条件、生产技术、质量要求、贮藏、生产记录等要求。

本标准适用于猴头菇液体菌种的生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB150.1压力容器第1部分：通用要求

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB5749食品安全国家标准生活饮用水卫生标准

GB/T12728食品安全国家标准食用菌术语

NY/T528食品安全国家标准食用菌菌种生产技术规程NY/T1731食品安全国家标准食用菌菌种良好作业规范

3术语和定义

GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1

发酵罐fermentationbioreactor

一种生物反应器，是指为活细胞或酶提供适宜的反应环境，让他们进行细胞增殖或生产的装置系统。3.2

发酵罐空消emptyfermentersterilization

是指在发酵罐内没有放发酵液时，对整个空的罐体进行灭菌消毒。3.3

发酵罐实消fermentersterilization是指加入培养基后消毒灭菌。

4生产条件

生产要求应符合NY/T528的规定。环境要求应符合NY/T1731的规定。液体种发酵罐质量应符合

GB150.1的规定。生产用水标准应符合GB5749的规定。

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5品种选择

选用高产、优质、抗逆性强、商品性好的猴头菇品种，从具相应资质的供种单位引种或本单位选育，并清楚地追溯菌种来源。菌种生产过程应符合NY/T528的要求。

6生产技术

6.1母种制备

6.1.1培养基配方

去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蛋白胨3g～5g，水1000ml。

6.1.2菌种活化

将保藏种接种到培养基中，培养温度22℃~24℃,避光恒温培养10d～15d，菌丝长满试管或者培养皿检验合格即可使用。

6.2摇瓶生产

6.2.1容器

采用无色专用玻璃菌甁，用棉塞、硅胶塞或专用封口透气膜封口。

6.2.2培养基配方

去皮马铃薯200g、葡萄糖20g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、pH4.0。

6.2.3培养基配制

去皮马铃薯煎汁1000ml，放入葡萄糖、磷酸二氢钾和硫酸镁，充分溶解均匀后，装入摇瓶，装液量不超过摇甁容量的3/5，摇瓶中放置磁力搅拌棒，封口后待灭菌。

6.2.4灭菌

将摇瓶放入高压灭菌锅内进行灭菌，灭菌蒸汽压力0.11MPa，在121℃下维持20min～30min。

6.2.5接种

待培养基冷却至25℃以下，在无菌条件下，用打孔器打孔（5mm孔径）或接种钩取（5mm～8mm×5mm~8mm）4块～5块活化母种块迅速转接于摇甁培养基内，封口。

6.2.6振荡培养

将摇瓶放入摇床内，培养温度22℃~25℃,转速150r/min～170r/min，避光条件培养6d～8d。

6.3发酵罐生产

6.3.1发酵罐空消

发酵罐初次使用、出现杂菌、长期放置及更换品种时，应进行空消灭菌。蒸气压力0.11MPa～0.14MPa、恒压维持40min。

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6.3.2培养基配方

去皮马铃薯（200g）煎汁1L、葡萄糖20g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、pH4.0。

6.3.3投料与定容

原料按比例加水后搅拌均匀，加入罐内，装液量为罐体容量的70%～80%，加入0.01%消泡剂，拧紧上料口盖。

6.3.4发酵罐实消

液体种发酵罐内蒸汽压力控制在0.11MPa～0.12MPa，恒压维持60min～90min。

6.3.5冷却

灭菌结束，关闭空气过滤器灭菌阀与排气阀，缓慢打开夹套排气阀降压至0MPa，通入冷水降温；同时缓慢打开发酵罐罐内排气阀降压，待压力接近0.02MPa～0.04MPa时向罐内通入无菌空气，调整排气阀，维持罐压0.04MPa～0.05MPa，培养液温度降至25℃以下时，关闭夹套进水阀。

6.3.6接种

将摇瓶接种管和发酵罐接种口用75%酒精消毒，用95%酒精的火焰圈套在接种口上，轻微打开阀门，使发酵罐罐内压力为0.01MPa。点燃火焰圈，在火焰保护下用镊子去掉瓶塞，打开接种口阀门，将摇瓶菌种注入发酵罐。接种量为0.5%～1.0%。接种后迅速关闭接种阀门，去掉火焰圈，继续通