非小细胞肺癌文献一篇.pptVIP

2015样品处理2019MS数据分析2016LC/MS分析2020质量控制2017MS/MS分析2021统计分析实验流程主要内容非参数秩和检验:评估肿瘤组织与两种正常组织中检测的二肽水平有无明显变化结果:没有相关的二肽有显著性差别01二项分布:在检测的334种二肽中有105种有统计学意义01因3个样本来自同一个体，故需分析样本大小对代谢物检测结果的影响01统计分析肺癌相关二肽数据库产生肺癌组织中二肽的识别MS/MS二肽谱图不同分析条件下二肽的识别肺癌组织中二肽的靶标分析结论验证研究意义及不足实验结果主要内容标准品二肽合成:基于组合合成法的阵列及包含组氨酸的二肽，不能合成的二肽通过AanspecInt公司获得混合物配置:将7-30毫微升具有相同C羧基端的18种二肽混合并用50%乙腈和水稀释成10μM，丹酰衍生化后，采用LC方法B及MS全谱扫描肺癌相关二肽数据库01氨基酸是生物样本中唯一分析物，故用氨基酸作为标准品02氨基酸保留时间的多项对齐是对齐二肽保留时间最好的方法肺癌相关二肽数据库361种二肽中只有161种有独特的化学分子式，只有17种是单一的异构体(AA)同分异构体二肽的识别需要仔细比较其滞留特性合并肿瘤样本再分析得到279种二肽，其中234种二肽的质量精度＜5ppm，45种＜10ppm，将279种二肽保留时间与数据库比对，大部分二肽保留时间在0.1min内，但有精氨酸的二肽标准品和样品有明显不同肺癌组织中二肽的识别*LiquidChromatography/MassSpectrometryMethodsforMeasuringDipeptideAbundanceinNon-SmallCellLungCancer褚晓芳使用液相色谱-质谱技术分析非小细胞肺癌患者组织中二肽丰度的变化主要内容肺癌简介实验流程样品处理LC/MS分析MS/MS分析MS数据分析质量控制统计分析主要内容实验结果肺癌相关二肽数据库产生肺癌组织中二肽的识别MS/MS二肽谱图不同分析条件下二肽的识别肺癌组织中二肽的靶标分析结论验证研究意义及不足在美国，肺癌死亡率在所有癌症中最高，2012年共有165000死于肺癌。在全世界范围内，估计肺癌影响超过100万人。肺癌中80%是非小细胞肺癌目前，肺癌早期及进展阶段仍没有灵敏度高的诊断手段肺癌相关的代谢组学研究较少321肺癌简介01肺癌早期的代谢组学研究表明在肿瘤样本中有许多代谢物发生表达的改变02在不同化疗耐药性的肺癌细胞系中，胆碱、脂肪、乳酸、甘氨酸水平有明显的改变03在埃罗替尼治疗或进行切除手术的患者中，同侧细支气管肺泡癌发生病变04在肺癌患者血清和组织样本的混合物中，有48种代谢物在组织和肺癌不同进展阶段有明显改变肺癌相关研究二肽在蛋白质营养、增长及发展中其重要作用01二肽水平通过肽转运体中的膜蛋白调节02肽转运体广泛存在于大脑、胰腺、肠、肾脏等器官中03二肽对真核生物的作用样品处理01MS/MS分析03质量控制05LC/MS分析02MS数据分析04统计分析06实验流程主要内容样品处理Testingset:9名确诊为肺癌恶性腺瘤的男性样本:①有代表性的肺癌组织切片②与肿瘤组织相邻的正常组织切片③距原发肿瘤＞3cm处的正常组织切片Validationset110名确诊为肺癌恶性腺瘤的男性2样本:有代表性的肺癌组织切片距原发肿瘤＞3cm处的正常组织切片3样品处理Validationset016名确诊为肝癌的患者02目的:证明在非小细胞肺癌患者中找到的代谢物标志物具有特异性03所有样品在分离后快速冷冻30-60min，处理前在-80℃保存04样品处理将分离的组织称重后用不锈钢珠同质化，频率为20次/s，持续30s1加入标准溶剂混合物重复4次同质化过程2用蒸汽离心蒸发浓缩器干燥氯仿-甲醇-水层中的极性代谢物3将干燥后的样品复溶于水4组织提取样品处理样品处理⑤衍生化：50μL极性代谢提取物+25μL0.1M的四硼酸钠缓冲液+50μL20mM丹磺酰氯(乙腈为溶剂)，涡旋混匀丹酰衍生化目的:提高代谢物检测敏感性10-1000倍提高极性代谢物在液相色谱柱上的保留和分离⑥室温孵育30min，加入50μL0.5%甲酸停止反应⑦将反应混合液上层清液转移至自动采样瓶样品处理