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目录
摘要I
AbstractIII
第一章文献综述1
1.1研究背景1
1.1.1盐胁迫1
1.1.2盐生植物简介1
1.1.3盐腺起源与结构3
1.1.4泌盐盐生植物二色补血草盐腺发育研究概况4
1.1.5植物长链非编码RNA研究概况7
1.2论文选题的目的和意义11
第二章材料与方法12
2.1植物材料12
2.1.1二色补血草的培养12
2.1.2烟草的培养12
2.2菌种和质粒12
2.3酶与各种生化试剂12
2.4实验方法13
2.4.1总RNA的提取13
2.4.2去除RNA中的DNA13
2.4.3RNA反转录14
2.4.4总DNA的提取14
2.4.5PCR14
2.4.6回收目的基因15
2.4.7目的基因与克隆载体连接16
2.4.8转化大肠杆菌以及阳性菌的鉴定16
2.4.9质粒提取17
2.4.10DNA测序18
2.4.11克隆载体的酶切鉴定18
2.4.12表达载体的构建和瞬转烟草19
2.4.13二色补血草的病毒诱导基因沉默实验21
2.4.14叶圆盘实验21
2.4.15盐处理及各生理指标测定22
2.4.16NBT和DAB染色23
2.4.17WesternBlot23
2.4.18转录激活验证24
2.4.19双荧光素酶实验24
2.4.20核质分离25
2.4.21RNApull-down25
2.4.22二色补血草CRISPR敲除载体构建26
2.4.23遗传转化二色补血草27
2.4.24RACE实验27
2.4.25GUS酶活测定28
2.4.26GUS染色29
2.5所用网站和软件29
第三章实验结果与讨论30
3.1二色补血草盐腺发育相关lncRNAs的筛选30
3.2调控盐腺发育的lncRNA的筛选及验证33
3.3LncRNA-A11全长克隆及生信分析35
3.4LncRNA-A11编码能力验证38
3.5利用VIGS实验确认lncRNA-A11在盐腺发育及抗盐中的作用39
3.5.1LncRNA-A11正调控二色补血草盐腺发育但不影响盐腺泌盐39
3.5.2LncRNA-A11正调控二色补血草的耐盐性41
3.6LncRNA-A11调控盐腺发育的分子机制42
3.6.1LncRNA-A11不通过顺式作用调控盐腺的发育42
3.6.2LncRNA-A11反式调控下游靶基因LbGL142
3.6.3LncRNA-A11互作蛋白的筛选及验证46
3.6.4互作蛋白LbRBP7作为转录激活因子负调控盐腺发育49
3.6.5LbRBP7促进LbGL1的转录51
3.6.6LncRNA-A11通过结合LbRBP7，抑制LbGL1的表达进而正调控盐腺发育52
3.7讨论53
3.7.1LncR
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