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化学合成法之催化卤素置换法*用氚化金属还原剂，如NaBT4、LiBT4、KBT4、LiAlT4等，它们可以选择性地将羧酸、酯、酮、醛和腈类化合物还原成相应的醇类或胺类而实现定位标记生物合成法*能定位标记，而且保留生物活性主要根据“酶促反应”的原理，以氚的标记物为底物，利用专一性很强的酶作为催化剂，将该标记物转化成所需的另一种标记物三、放射性碘标记化合物的制备*√√√125IT1/2＝60d标记物储存应用一段时间、商品化低能γ射线，无β粒子辐射分解少，标记物稳定性好三、放射性碘标记化合物的制备(一)同位素交换法*CONHCH2COOHICONHCH2COOH131I+Na131IKIO3H+131I－邻碘马尿酸HOIHO131INa131I150℃1h131I－6－胆固醇(二)蛋白质、多肽的碘标记技术前提：1）待标记物要有易被碘原子结合或取代的基团，对蛋白质和多肽而言，最主要是酪氨酸，它易被碘化的部位是苯环上羟基的两个邻位。组氨酸和色氨酸残基也有一定活性。（箭头）2）必须先把125I-氧化成125I2Na125IHOCH2CHCOOHCH2CHCOOHHO125I+125I2NH2NH2125I－碘代酪氨酸氧化剂Ch-T，H2O2标记原理：(二)蛋白质、多肽的碘标记技术蛋白质、多肽的碘标记常用方法01直接标记法氯胺-T法乳过氧化物酶法固相氧化法02间接标记法03*1.氯胺T法SO2NCH3NaCl+2Na125I+2H2OSO2NHCH3+125I2++NaCl2NaOH温和氧化剂⑴反应液组成：Na125I74MBq（10μL）蛋白质5μg（10μL）缓冲液（pH7.4）30μL氯胺T100μg（10μL）室温1~3min⑵加Na2S2O5200μg（0.2mL)中止反应⑶用SephadexG50柱层析分离纯化125I-蛋白质*氯胺-T是较强的氧化剂，对一些生物活性不稳定的物质，例如一些补体成分、某些激素、酶和受体都有一定的损伤2.乳过氧化物酶法乳过氧化物酶+H2O2O2（新生氧）标记原理：Na125I125I2⑴反应液：Na125I37MBq（10μL）缓冲液（pH5.6）30μL蛋白质5μg（10μL）乳过氧化物酶25ng（10μL）H2O2200ng（10μL）室温7min⑷巯基乙醇（10mmol/L）0.5mL(中止反应)⑵H2O2200ng（10μL）室温7min⑶H2O2200ng（10μL）室温7min⑸加入NaI载体溶液,用SephadexG50柱层析分离纯化125I-蛋白质注意事项：H2O2保持低浓度：0.1mmol/L乳过氧化物酶使用前新鲜配制酶的浓度↑，标记率↑酶的用量1%标记蛋白↓酶自身碘化而引入的放化杂质乳过氧化物酶-葡萄糖氧化酶法(LPO-GO)葡萄糖氧化酶＋葡萄糖H2O2标记原理：乳过氧化物酶O2（新生氧）Na125I125I2⑴反应液：Na125I37MBq（10μL）缓冲液（pH7.0）30μL蛋白质5μg（10μL）乳过氧化物酶25ng（10μL）葡萄糖氧化酶10ng（10μL）室温4~20min葡萄糖(0.5%)5μL(2)0.1%叠氮钠100μL中止反应(3)
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