基因工程与食品产业PPT课件.pptxVIP

基因工程与食品产业;第一节基因工程概述第二节;第一节基因工程概述一、基因;核酸核糖核酸（RNA）脱氧核糖;元素组成:C、H、O、N、P（;核酸中的碱基分两类：（1）嘧啶;…核苷…脱氧核苷碱基种类：核苷;核苷酸(ribonucleot;5′端3′端多个核苷酸3′,5;无标题;复制(replication);参与DNA复制的物质DNA复制;半保留复制：新DNA分子中的两;无标题;无标题;转录(transcripti;一、基因工程的概念与主要内容（;食品基因工程：利用基因工程的技;（二）?基因工程的主要内容概;酶段子体;无标题;二、?基因工程的发展概况;PaulBerg(who;1972Sta;第一例基因工程实验;1972年美国加州大学的Boy;1986年美国和法国的科学家在;在农业上，基因工程发展速度势头;我国的农业基因工程研究于20世;第二节酶和基因载体;基因工程载体(carrier);一、基因工程的工具酶种类主要;能将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断;（一）?限制性内切酶?在早期;限制性内切酶是基因工程中不可缺;无标题;1、限制性内切酶的分类;Ⅱ型限制性内切酶：;Ⅲ型限制性内切酶：一些具有独特;I型限制性内切酶、Ⅲ型限制性;2、Ⅱ型限制性内切酶的命名与作;例如，EcoRI中的Eco表;EcoRI是最早发现的Ⅱ型限制;无标题;无标题;Ⅱ型限制性内切酶是一种位点特异;无标题;限制性内切酶的切割方式限制性内;无标题;无标题;平齐末端:有些限制性内切酶在同;无标题;cDNA是在逆转录酶催化作用下;2、?DNA连接酶???DN;无标题;T4DNA连接酶的相对分子质量;3、DNA聚合酶??(DNA;耐热DNA聚合酶(TaqDNA;DNA连接酶与聚合酶的区别DN;（1）?大肠杆菌DNA聚合酶I;无标题;核酸外切酶活性3?→5?外;(2）大肠杆菌DNA聚合酶I大;Klenow片段的主要用途补平;（3）T4噬菌体DNA聚合酶?;主要用途补平或标记限制性内切酶;（4）T7噬菌体DNA聚合酶及;（5）?耐热DNA聚合酶(Ta;（6）?末端转移酶????催化;4.碱性磷酸酯酶???碱性磷酸;主要用途：去除DNA和RNA的;5.S1核酸酶是一种特异性单;主要用途：去除DNA片段的单链;6.??逆转录酶?(reve;逆转录酶具有三种活性：RNA指;二、基因工程载体理想的基因工;（3）在其DNA序列中有适当的;无标题;常见的基因载体有：细菌质粒载;（一）质粒载体??(plas;质粒的大小差异很大，小的不到1;质粒的命名：通常用一个小写的p;构建一种质粒载体，对质粒通常有;几种常用的质粒载体1、质粒载;（二）?噬菌体载体细菌质粒载;噬菌体作为载体，可插入10～2;2.?λ噬菌体????;λ噬菌体是一种线状双链分子，长;3.M13载体???M13;M13作为载体有两个特性：;（三）黏性质粒载体??也有人称;重组噬菌体的DNA进入大肠杆菌;第三节基因工程的基本技术;通常，我们把插入到载体内的非自;目前采用的分离、合成目的基因的;2.?物理化学法??利用核酸D;（1）密度梯度离心法：;（2）单链酶法：碱;（3）分子杂交法：;3.化学合成法???;化学合成法的最大优点是能按照人;4.酶促逆转录合成法??;5.PCR扩增法??当巳知目的;PCR反应体系应具备的条件：;PCR反应过程包括：1.DNA;（二）DNA序列测定?DNA序;核苷酸序列测定的方法有：化学降;1.化学降解法;2.?酶促法;3.自动化测序法???Prob;这些有荧光的带中每一条都代表一;二、目的基因与载体的连接;通常连接的形式有：黏性末端连接;（一）黏性末端连接????黏性;不同限制酶切位点连接??;（二）?平端连接????;（三）人工接头连接???人工;无标题;（四）同聚物加尾连接利用末端;无标题;三、重组DNA向受体的转化??;常用的受体细胞以细菌为主，其中;（2）转染：是指噬菌体、病毒、;体外包装转染法?体外包装：指在;又称之为直接显微注射。一般是用;（4）电转化法也有人称做高压电;又称高速微型子弹射击法、微弹射;（6）脂质体介导法（7）其他方;受体细胞：也叫宿主细胞，是指在;大肠杆菌是目前基因工程中最常用;四、重组体的筛选与外源基因的鉴;1、针对遗传表型筛选按载体的性;（二）?重组体的鉴定经;1、?报告基因的检测法????;2、分子杂交技术??为了从分;（1）点杂交：将待测DNA或R;基本原理和操作过程是：提取重组;（3）?Northern吸印杂;（4）?Wes