寄生虫学免疫检验技术及进展.ppt

*寄生虫学免疫检验技术及进展一、寄生虫学常用免疫检验技术1、皮内试验2、IHA（间接血凝试验）3、ELISA（酶联免疫吸附试验）4、Dot-ELISA（斑点－ELISA）寄生虫学免疫检验技术及进展一、寄生虫学常用免疫检验技术5、DIFA（斑点免疫渗滤试验）6、免疫微球技术7、Western-blot（免疫印迹技术）8、免疫组织化学技术寄生虫学免疫检验技术及进展一、寄生虫学常用免疫检验技术9、其它标记技术1）酶标-HRP（辣根过氧化物酶）、LP（碱性磷酸酶）2）PAP（非酶标技术）3）ABC（生物素-亲和素系统）4）放射性同位素5）免疫荧光二、敏感性与特异性1、敏感性2、特异性三、寄生虫Ag的分离、纯化和鉴定1、分离：1）虫体抗原：0.9%生理盐水反复洗涤，在磷酸盐缓冲液中制成匀浆，离心后的上清液。血吸虫不能久放。2）ES抗原：多来自虫体的培养液。如丝虫、旋毛虫。3）膜抗原：A.表面蛋白：用高离子浓度的缓冲液溶解。B.膜组成蛋白：清洁剂、有机溶剂等。三、寄生虫Ag的分离、纯化和鉴定2、纯化：1)凝胶层析2)离子交换层析3)亲和层析三、寄生虫Ag的分离、纯化和鉴定3、鉴定：1)抗原组分及化学性质A.SDS（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）B.抗原的氨基酸序列分析C.其它:放射免疫沉淀，双向电泳三、寄生虫Ag的分离、纯化和鉴定3、鉴定：2)抗原的活性及其特异性鉴定A.免疫学方法：ELISA；Western-blotB.体外试验：如淋巴细胞转化试验—纯化的血吸虫虫卵抗原比粗抗原刺激淋巴细胞母细胞化的能力强。C.动物试验：如血吸虫虫卵抗原可使小鼠产生肺肉芽肿和足垫超敏反应。四、Ab制备1、多抗2、单抗五、应用血吸虫1、检查抗体血吸虫1、检查抗体：1）检测种类：IgM，IgG（G1-G4），IgA2）方法：皮试、IHA、ELISA、Dot-ELISA、DIFA、Western-blot血吸虫1、检查抗体：3）存在的问题：A.不能区分现症病人B.疗效考核不好：现在采用短程Ab—如IgG4亚类，治疗前和后之比2.1。C.假阳性、假阴性。Western-bot虽然效果好，但操作复杂。不便于临床应用。血吸虫2、检查抗原：1)检查抗原的种类：A.表皮膜抗原B.虫卵抗原。C.肠相关抗原：特别是雌虫2)检测对象:A.血清;B.尿液;*