吴琼-03基因与研究方法ppt课件.pptxVIP

基因及其研究方法利用克隆、PCR、分子杂交方法研究多元化的基因

基因类别结构基因 包括编码结构蛋白和酶蛋白的基因，也包括编码阻遏蛋白和激活蛋白的基因。调控基因 包括调节基因、启动基因和操纵基因。Operon:rDNA,tDNA……

思考操纵子（operon）？操纵基因（operator）？调节基因（regulatorygene）？

操纵子J.Monod与F.Jacob

断裂基因（SpliteGene）70年代由R.J.Roberts和P.A.Sharp首先报道。10S?珠蛋白前体RNA以及其15S?珠蛋白mRNA与小鼠?珠蛋白基因杂交形成R环的电镜图

Intron，Extron卵清蛋白基因及其与mRNA或cDNA的杂交图1978年，Gilbert提出内含子、外显子概念。

肌球蛋白轻链LC1与LC3基因TATATATAAATAAA123456789转录加工1456789polyALC1mRNALC3mRNA2356789

酵母细胞色素b基因的内含子2参与编码成熟酶，成熟酶又反过来参与内含子2的剪接，产生成熟的mRNA内含子编码内切酶

插入序列与间隔区插入序列 内含子间隔区 转录间隔区 非转录间隔区

剪切的思考

－Crick1978年提出的几个问题剪切作用若是通过酶来作用的，酶是如何识别RNA上特定位点的？剪切酶有没有特异性？不同RNA是否需要不同的酶？切除的RNA是以线状还是环状存在的？命运如何？内含子有无调控作用？

前体mRNA的拼接核酶的发现及意义 1981年，T.Cech和S.Altman剪接识别顺序 ChambonsruleGT------AG内含子结构SnRNA在RNA剪接中的作用。(smallnuclearRNA) U-SnRNA90-400nt

编码核苷酸比实际多，Why？1978年，Sanger分析了ΦΧ174中的核苷酸，5386个。9个基因，编码2000个氨基酸。???Barrell（Sanger实验室）

重叠基因噬菌体?X174的重叠基因各基因的功能：A，DNA单链合成和双链的复制；B、C、D，单链的合成和（或）包装；F、G、H，噬菌体衣壳的结构蛋白；J，参与病毒颗粒构成的一种小的碱性蛋白；K，产物未知；E，细胞裂解

基因重叠的方式包含首尾重叠三个基因的三重重叠反向重叠操纵子重叠

跳跃基因1950年，B.McClintock发现玉米中的Ac-Ds系统。

转座子

转座子转移

原核生物的转座模型

转座带来的基因重排

转座子的遗传学效应引起插入突变。插入位置上出现新基因。原来位置上保持或切离着原有的转座子。造成插入位置上受体DNA形成正向重复序列。调节基因活动的开关。增加同源序列的整合。

C值矛盾不同门类生物的C值分布

基因特性结构基因，调控基因操纵子，操纵基因断裂基因，Intron，Extron重叠基因跳跃基因，转座子C值矛盾

DNA分析方法与技术组成Hemoglobin的四种多肽链在发育中是变化的。

我们要做什么？将庞大的DNA链切成小的可操作片断。对要保存和进一步研究的DNA片断进行扩增。证明、获取DNA片断中所需基因。对感兴趣的片断进行表征。

限制性内切酶常用限制性内切酶种类及特性W.Arber和H.O.Smi