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客户文章分享：长链非编码RNAH19作为内源竞争性RNA通过调控RNAmiR-29b-3p来调节膀胱癌细胞上皮间质转化和转移

根本信息

题目：lncRNAH19regulatesepithelial–mesenchymaltransitionandmetastasisof

bladdercancerbymiR-29b-3pascompetingendogenousRNA

期刊：BiochimBiophysActa

影响因子：6.261

主要技术：

病毒转染〔慢病毒包装、腺病毒包装〕

分子互作技术〔Pulldown、RIP〔MS2/Ago〕、双荧光素酶实验〕

检测分析〔免疫组化、克隆形成、细胞划痕愈合、CCK8、EdU、HE染色、WB、ELISA、q-PCR〕

分子定位技术〔FISH、IHC、免疫荧光、激光共聚焦〕

芯片技术〔lncRNA/mRNA芯片〕

研究背景

EMT(epithelial-to-mesenchymaltransition)是多种肿瘤开展中的一个关键步骤，主要在肿瘤的侵袭和转移中发挥作用。EMT的改变主要表现在分子、细胞、组织水平上，它涉及了组织细胞形态的改变，同时也涉及了组织特异分子表达的改变。通过检测相关分子表达水平或者通过检测相关细胞形态的改变可以评估肿瘤的进展、了解药物的疗效、基因的功能作用。lncRNA〔longnoncodingRNAs〕与肿瘤的发生开展关系密切，越来越多的研究说明，lncRNA可以调控肿瘤细胞的增殖、迁移、凋亡、分化进而调控肿瘤的发生开展。

本文以膀胱癌和肿瘤侵袭为研究对象，聚焦EMT过程和lncRNA的功能机制，以lncRNA调控EMT的机制为主线，综合运用芯片、生物信息学分析、分子互作技术〔RIP、RNApulldown、双荧光素酶〕、分子定位〔免疫荧光、FISH〕等技术研究了lncRNA的下游互作分子，探讨了H19〔lncRNA〕的功能机制。构建了H19调控膀胱癌侵袭、转移的作用轴线〔如下列图〕。

图H19作为内源竞争RNA通过调控miR-29b-3p来调节膀胱癌细胞的EMT和转移

研究内容及结果

临床研究水平，研究了正常人和病人H19和DNMT3B的表达水平和相关性。

体外实验，寻找并综合运用多种技术手段验证了H19的相互作用靶分子miR-29b-3p及miR-29b-3p的相互作用靶分子DNMT3B

体内实验，运用裸鼠成瘤实验验证了H19对肿瘤侵袭转移的作用。

临床研究水平

研究了癌组织和癌旁组织以及膀胱癌细胞系中H19和DNMT3B的表达水平和相关性。发现H19和DNMT3B在癌组织中高表达而在癌旁组织中低表达。运用pearsoncorrelation分析发现H19和DNMT3B的高表达具有正相关性。这暗示了H19对DNMT3B可能具有正调控关系。这是后面作者进行生物信息学预测和机制功能研究的根底。

作者首先统计了临床上H19的表达和膀胱癌患者性别、年龄、肿瘤病理分期、淋巴转移的关系。发现高表达的H19和膀胱癌的分期和淋巴转移存在密切关系〔P0.05〕。

表.H19表达水平与膀胱癌患者分期和淋巴结转移存在相关关系

运用芯片和q-PCR研究了H19和DNMT3B在膀胱癌和癌旁组织中的表达水平。芯片技术发现H19和DNMT3B在肿瘤组织中均高表达，而在癌旁组织中低表达，芯片的结果得到了q-PCR的验证。

图芯片和q-PCR结果显示H19和DNMT3B在癌组织中高表达而在癌旁组织中低表达

3、Pearsoncorrelation分析发现H19和DNMT3B的高表达具有正相关性，说明H19对DNMT3B的表达可能具有正调控作用，如果H19作为ceRNA，那么可能存在miRNA来受lncRNA的调节来调控DNMT3B。

Pearson关联分析说明H19和DNMT3B表达存在正相关

4、在组织水平之外，作者也研究了常用的几种膀胱癌细胞系中的H19表达水平，发现在常用的几种癌细胞系中H19均高表达。

图H19在正常和几种膀胱癌细胞系中的表达

体外实验

临床实验证实了H19与膀胱癌的分期、转移有密切的关系，同时H19和DNMT3B可能存在正调控关系。作者综合运用多种功能实验研究了H19的体外功能，在此根底上然后运用生物信息学分析方法和多种互作技术预测并且验证了H19的互作分子miR-29b-3p和下游调控靶分子DNMT3B。

功能研究。作者综合运用CCK8、EdU、克隆形成、划痕愈合、Transwell、免疫荧光等技术对H19的生物学功能进行了研究，发现H19可以促进癌细胞的增殖、侵袭、迁移、