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第六章多克隆抗体

传统的抗体制备方法是将一种天然抗原经不同途径免疫动物，由于抗原性物质具有多个抗原决定簇，

可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌抗各种决定簇的抗体，故在其血清中实际上是含多

种抗体的混合物，所以称这种免疫法所获得的免疫血清为多克隆抗体(polyclonalantibody，PcAb)。多克隆

抗体的亲和力较一般单克隆抗体高。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为制备高效价和高特异性的多

克隆抗体，必须要有理想的免疫原、适宜的动物及切实可行的免疫方法。本章主要介绍多克隆抗体的制备

及相关技术。

第一节动物选择

实验动物是生物医学中的重要组成部分。目前常用于生物医学科学研究的实验动物种类很多，主要包

括有两栖纲的青蛙、蟾蜍，鸟纲的鸡、鸭、鸽等，哺乳纲啮齿目的小鼠、大鼠、豚鼠等，兔形目的家兔，

食肉目的猫、狗，有蹄目的羊、猪和灵长目的恒河猴、猩猩、绒猴等。其中最常用和用量最大的是哺乳纲

啮齿目动物，其次是兔形目和食肉目等。

一、实验动物的生物学特性

实验动物选择得当与否是实验研究成败关键之一。掌握实验动物的生物学特性，则能以最佳的设计选

择实验动物，进行科学实验，从而获得预期的实验结果。

1.小鼠小鼠是啮齿目中体型较小的动物。新生小鼠1.5g左右，21天断乳时12～15g，1.5至2月龄

体重达20g以上，可供实验使用。成年雌小鼠体重18~35g，成年雄鼠体重20~40g。小鼠性情温顺，易于

捕捉，对外来刺激敏感，喜群居于阴暗环境。

2．兔草食性动物，性情温顺，胆小易惊，喜居安静、清洁、干燥、凉爽、空气新鲜的环境，耐冷

不耐热，耐于不耐湿。兔耳大，表面分布有清晰的血管。有特殊的血清型和唾液型，血清型分为α、β、αβ

和O型四种。α、α型易β产生人A型抗体，β、O型易产生人B型抗体。唾液型分两种：排出型与非排出

型。排出型易获得人血细胞A型物质，非排出型不易获得，这种A型物质与A型抗体产生能力有关。因

此，要获得A型抗体，应选用排出型的α、α血清β型兔。由于抗原刺激机体后，体液免疫应答反应强烈，

故兔被广泛用于制备高效价的特异性强的免疫血清。

3．豚鼠草食动物，性情温顺，胆小，对外界刺激极为敏感，喜居干燥、清洁的环境。自动调节体

温的能力较差，对环境温度变化较为敏感，最适宜的温度为18~20℃，对抗生素敏感。

4．羊草食动物，性情温顺，合群，易于接近，喜居干燥、清洁的环境，怕潮湿，怕热不怕

冷，寿命为15年。山羊可用于生产多种抗血清，也可用于营养学、免疫学、微生物学、生理学

等方面的研究。绵羊常用作制备抗血清，其红细胞是血液学诊断中最常用的材料。

二、选择实验动物的原则

1．3R原则3R指的是reduction(减少)、replacement(替代)和refinement(优化)。“减少”指减少实验用

的动物和实验的次数；“替代”指尽可能采用可以替换实验动物的替代物；“优化”指对待实验动物和动物

实验工作应做到尽善尽美。

2．从微生物学和寄生虫学标准去选择实验动物要求选用三级的实验动物，原因是三级实验动物已

经排除了人兽共患疾病，排除了实验动物本身的传染病，也排除了影响实验研究的相应微生物和寄生虫，

使实验研究处于没有或很少有外源干扰的情况下进行。

3．从遗传学的观点选择实验动物即根据动物的不同生物学特性选择适宜的实验动物。

4．不能忽略的一些因素如性别、年龄、体重、营养状况、饲养环境等。

三、免疫动物的选择

可作为免疫用的动物主要是哺乳类和禽类，常选用的有家兔、绵羊、豚鼠、马、鸡等。动物种类的选

择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗体的数量和用途，如制备抗γ-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和

山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清。具体选择时，应考虑以下因素：

(一)动物种系

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