细胞化学术ppt课件.pptxVIP

;发展史：

细胞化学是研究细胞显微结构和超微结构的化学组成及其定位的科学（定量）。

研究对象是生物大分子：核酸、蛋白质、酶、多糖、脂类等在细胞或组织内的结构、分布及变化，为深入阐明细胞和异常细胞的增值与分化、遗传与发生、病理和病因等提供科学依据。

1830年比利时植物学家Raspail发表论文《在生理学重视用显微镜观察生化物质》。

1830-1870组织化学主要用于揭示生物界中的生理现象。1880-1920随着显微镜的改进和组织细胞学染色技术的发展，组织化学的概念从生理组织学转变为显微化学。

1900-1935年细胞化学技术在病理学染色方法中的应用，丰富了显微镜下证实核酸、蛋白质、酶、多糖、脂类等物质的组织化学内容。

以后发展了酶细胞化学。;20世纪50年代，电子显微镜的问世，观察细胞的超微结构。到80年代末，发展与完善了电镜细胞化学。70年代由于细胞显微分光光度法和荧光显微光度法的建立，使细胞化学的成分得以定量、形成定量细胞化学。80-90年代，流式细胞仪可对单细胞化学成分定量分析的新技术（每秒可测上万个信息）。80年代后期，创立了激光扫描共聚焦显微技术，对单个细胞进行CT分析，通过计算机进行三微立体旋转，从各角度分析细胞深层和细胞表面的各种结构。可研究活细胞和定量分析细胞内的遗传物质DNA、RNA、细胞器、酶的含量等。

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;基本原理：

细胞中的某种化学成分和其相应的底物呈现一系列的化学反应，形成在显微镜下可见到的反应产物。对细胞内的各种成分进行定性、定位、定量研究。（特异性）

常用方法及原理：

一?金属-金属盐沉淀法原理利用金、银、铜、铁、钴等金属化合物与细胞化学成分反应过程中生成有色沉淀。

二偶氮偶联法原理用人工的酶底物，在酶的作用下产生分解产物，后者与重氮盐结合，引起偶氮偶联法反应，形成不溶性偶氮色素。

三过碘酸Schiff氏剂反应原理

四多糖（糖原）+过碘酸→醛基+Schiff氏剂→紫红色化合物

显示细胞内糖类为PAS反应

显示细胞核内为Feulgen反应

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;;（四）。多糖的显示法—过碘酸雪夫（Schiff）氏剂反应

多糖（糖原）+过碘酸→醛基+Schiff氏剂→紫红色化合物

（五）。酶的显示

1．?碱性磷酸酶的显示（钙-钴法）

用磷酸脂为底物，被碱性磷酸酶水解后释放出磷酸基，在pH9。2—9。8条件下，磷酸基与钙形成磷酸钙（无色）+硝酸钴→磷酸钴（无色）+黄色硫化胺→硫化胺钴（黑色）

结果碱性磷酸酶成浅灰、灰黄、灰黑色。色深者表示酶多。对照组无反应。

;ATPase;ATPase;G-6-Pase;G-6-Pase;G-6-Pase;G-6-Pase;?

4．5-核苷酸酶的显示法（5-Nucleoyidase）

此酶作用于5-核苷酸、水解嘌呤核苷酸或嘧啶核苷酸第五位碳原子的磷酸分子，释放磷酸基+硝酸铅→磷酸铅（黑色）。

结果5-核苷酸酶呈棕黑色沉淀，色深者表示酶多。对照组无反应。

免疫细胞化学术

应用抗原与抗体结合的免疫学原理，检测细胞内的多肽、蛋白质及膜抗原和受体等大分子物质的存在与分布。

其特点是特异性强、敏感性高、进展迅速，应用广泛。

程序：

﹙1﹚抗原（提取动物某些肽类或蛋白质）→注入另一动物体内

→产生抗体（Ig）→血清分离提取抗体

﹙2﹚抗体标记

抗体+荧光素（异硫氰酸荧光素）→与相应抗原结合呈黄绿色荧光

抗体+辣根过氧化物酶（HRP）→与相应抗原结合呈棕红色荧光

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;方法：

（1）直接法抗原——抗体直接结合简便、迅速，

但是敏感性较低。

（2）间接法一抗体（作为抗原）→注入物体内→产生第二抗体

常用过氧化物酶——抗过氧化物酶复合物法（PAP法）。

较复杂，敏感性高

（3）新进展

亲合素（卵白素）——生物素法（LAB法）

桥连亲合素（卵白素）——生物素法（BAB法）

亲合素——生物素——过氧化物酶复合物法（ABC法）(市场商品)

?;组织培养术:

体外研究活细胞或组织的有价值的手段

无菌条件下，取活组织、活细胞（或传代培养的细胞

株）→培养液（天然或人工合成），在一定温度、

O2、CO2、、Ph→培养（加某种受试因素）→倒

置显微镜下观察：细胞活组织的增殖、分化、运动、

吞噬等。可连续录像观察。

;正常培养细胞;中药组细胞;西药组细胞;对照组细胞;中药组细胞;原位杂交术:即核酸分子杂交组织化学术。

基本原理：两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，通过

氢键结合，形成DNA-DNA，DNA-